Question

9．為了調查贛江的水質狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌的分離等工作．回答下列問題：
（1）制備實驗所需的培養基時，在各成分都溶化后和分裝前，要進行的是調整pH和滅菌，對培養基進行滅菌的常用方法是高壓蒸汽滅菌．倒平板時要待平板冷凝后，將平板倒置，其主要原因是防止培養皿蓋上的冷凝水落入培養基造成污染．
（2）該小組可采用圖②所示的稀釋涂布平板法（方法）檢測水樣中的細菌含量．在接種前，隨機取若干滅菌后的空平板先行培養了一段時間，這樣做的目的是檢測培養基平板滅菌是否合格；然后，將1mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經適當培養后，3個平板上的菌落數分別為39、38和37．據此可得出每升水樣中的活菌數為3.8×10⁷．
（3）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌．操作時，接種環通過灼燒滅菌，在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線．這樣做的目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落不連續單個菌落．
（4）在純化過程中，在固體培養基上劃線分離過程中，正確的操作是D
A．每次劃線時，接種環都需要蘸菌液一次
B．劃線分離時，需要把接種環深入到培養基中進行接種
C．劃線時要將最后一區的劃線與第一區的劃線相連
D．在超凈平臺中進行接種時，不能關閉過濾風．

Answer 1

分析 分析圖解：圖中細菌的分離的方法為①表示平板劃線法，②表示稀釋涂布平板法．
①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落．

解答 解：（1）制備實驗所需的培養基時，在各成分都溶化后和分裝前，要進行的是調整pH和滅菌，對培養基進行滅菌的常用方法是高壓蒸汽滅菌．倒平板時要待平板冷凝后，將平板倒置，其主要原因是防止培養皿蓋上的冷凝水落入培養基造成污染．
（2）該小組可采用圖②所示的稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量．微生物培養過程應該進行無菌操作，配制的培養基要進行高壓蒸汽滅菌，可以將滅菌后的空白平板進行培養以檢測培養基滅菌是否徹底；由由題意知1ml水樣中的菌落數是（39+38+37）÷3÷0.1×100=3.8×10⁴個，每升水樣中的活菌數為3.8×10⁴×10³=3.8×10⁷．
（3）平板劃線法操作時，接種環通過灼燒滅菌，在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線．這樣做的目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落不連續單個菌落．
（4）A、平板劃線法中，接種環只需要蘸菌液一次，進行連續幾次劃線操作，A錯誤；
B、劃線分離時，不能把接種環深入到培養基中進行接種，只能在培養基表面進行劃線操作，B錯誤；
C、劃線時要將最后一區的劃線不能與第一區的劃線相連，C錯誤；
D、在超凈平臺中進行接種時，不能關閉過濾風，D正確．
故答案為：
（1）調整pH      高壓蒸汽滅菌      防止培養皿蓋上的冷凝水落入培養基造成污染
（2）稀釋涂布平板法檢測培養基平板滅菌是否合格       3.8×10⁷
（3）將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落不連續單個菌落     
（4）D

點評 本題主要考查培養基的制作和微生物的接種方法，意在強化學生對實驗室的微生物的培養的相關知識的理解與掌握．