Question

1．Rag₂基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞．科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療．其技術流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的細胞核．
（2）步驟②中，重組胚胎培養到囊胚期時，可從其內細胞團分離出ES細胞．
（3）步驟③中，需要構建含有基因Rag₂的表達載體．可以根據Rag₂基因的 設計引物，利用PCR技術擴增Rag₂基因片段．用HindIII和PstI限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag₂基因片段．為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點．該基因表達載體上除含Rag₂基因外，還應含有啟動子、終止子、標記基因、復制原點（至少寫出兩個）．用顯微注射方法將基因表達載體導入ES細胞．
（4）為檢測Rag₂基因的表達情況，利用抗原抗體雜交（分子雜交）原理，可提取治療后小鼠骨髓細胞的蛋白質，用抗Rag₂蛋白的抗體進行雜交實驗．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療的過程圖解，其中①表示核移植過程，②表示早期胚胎培養過程，③表示采用基因工程技術將目的基因導入受體細胞．

解答 解：（1）核移植是將體細胞核移植到去核的卵母細胞中，所以實驗前要去除卵母細胞的細胞核．
（2）內細胞團位于囊胚中，所以重組胚胎培養到囊胚期．
（3）Rag₂基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割獲得的，所以表達載體應具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位點．基因表達載體的組成包括啟動子、終止子、標記基因、復制原點、目的基因（Rag₂基因）．將目的基因導入動物細胞最有效的方法是纖維注射法．
（4）基因表達的產物是蛋白質，所以提取小鼠骨髓細胞的蛋白質進行抗原-抗體雜交．
故答案為：
（1）細胞核
（2）囊胚  
（3）HindⅢ和PstⅠ啟動子、終止子、標記基因、復制原點   顯微注射
（4）抗原抗體雜交（分子雜交）     蛋白質

點評 本題結合圖解，綜合考查基因工程、細胞工程和胚胎工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節問題；識記核移植的具體過程；識記體外受精的具體過程及早期胚胎發育的過程，能結合所學的知識準確答題．