Question

15．回答下列有關的實驗問題：
（1）屠呦呦在青蒿素的研發上做出了重大貢獻．如要在短期內獲得大量青蒿植株幼苗，可以采用植物組織培養技術技術．實驗室中青蒿素與胡蘿卜素的提取方法相同，決定萃取效率的主要因素是萃取劑的性質和使用量．
（2）在生活中制作酸奶就要獲得優良乳酸菌菌種，應選用培養基培養．培養基中應含有碳源、氮源、水和無機鹽，同時需要在培養基中添加維生素，培養時還需提供無氧條件．
（3）為了分離果膠酶產生菌，科研人員將采集的果園土壤放入無菌水中，震蕩混勻，制成懸液．
①為獲得較均勻分布的單菌落，還需要將懸液進行梯度稀釋，用稀釋涂布平板法接種于固體培養基上．接種后的培養基倒置狀態放入培養箱．
②選擇單菌落數目適宜的培養基，加入一定濃度的剛果紅溶液（果膠與剛果紅結合后顯紅色），一段時間后洗去培養基表面的剛果紅溶液，觀察并比較菌落和透明圈直徑的比值，篩選果膠酶高產菌株．
③將獲得的菌株進行液體培養后，從培養液的上清液（填“上清液”或“沉淀物”）獲得粗提的果膠酶．將一定量的粗提果膠酶與適量果膠溶液混合，一定時間后測定吸光值來測定酶活性．進行吸光值測定時，需將等量失活的粗提果膠酶與等量果膠溶液混合，作為實驗的對照．

Answer 1

分析 酸奶制作的原理是乳酸菌進行無氧呼吸產生乳酸，為了防止微生物污染，制作酸奶過程中應進行無菌操作，微生物培養所用的培養基至少包括碳源、氮源、水、無機鹽等．
微生物的分離是研究和利用微生物的第一步，也是微生物工作的基本方法和重要環節．
土壤中的微生物很多，本題中要從土壤中獲得果膠酶高產菌株．
接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法

解答 解：（1）可以采用植物組織培養技術，在短期內獲得大量青蒿植株幼苗．萃取的效率主要取決于萃取劑的性質和用量，同時還受原料顆粒的大小、含水量等條件的影響．
（2）維生素是乳酸菌生長繁殖所必須的，在體內又不能合成，因此要在培養乳酸菌的培養基中添加維生素．乳酸菌屬于厭氧微生物，在有氧時無氧呼吸受抑制，因此培養厭氧微生物時則需要提供無氧的條件．
（3）①為獲得較均勻分布的單菌落，還需要將懸液進行梯度稀釋，并用稀釋涂布法接種于固體培養基上．接種后的培養基倒置狀態放入培養箱，防止培養皿蓋上凝結的水珠落入培養基造成污染．
②選擇單菌落數目適宜的培養基，加入一定濃度的剛果紅溶液（果膠與剛果紅結合后顯紅色），一段時間后洗去培養基表面的剛果紅溶液，觀察并比較菌落和水解（透明圈）直徑的比值，篩選果膠酶高產菌株．
③將獲得的菌株進行液體培養后，從培養液的上清液獲得粗提的果膠酶．將一定量的粗提果膠酶與適量果膠溶液混合，一定時間后測定吸光值來測定酶活性．進行吸光值測定時，需將等量失活的粗提果膠酶與等量果膠溶液混合，作為實驗的對照．
故答案為：
（1）植物組織培養技術    使用量
（2）維生素    無氧
（3）①梯度稀釋     稀釋涂布平板    倒置    ②菌落     ③上清液    等量失活的粗提果膠酶

點評 本題考查分離和培養果膠酶高產菌株的相關知識，意在考查學生的識記能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題和解決問題的能力．