Question

20．微生物培養(yǎng)技術(shù)在醫(yī)療、工業(yè)生產(chǎn)、食品生產(chǎn)等方面均有應(yīng)用．如表是一種培養(yǎng)基的配方，請回答：

牛 肉 膏	蛋 白 胨	NaCl	瓊  脂	水
0.5g	1g	0.5g	2g	200ml

（1）此培養(yǎng)基中的蛋白胨主要為微生物提供碳源、氮源和生長因子．在各種成分溶化后分裝前，必須進(jìn)行的是調(diào)節(jié)pH和滅菌．
（2）臨床使用抗生素前，有時需要進(jìn)行細(xì)菌的耐藥性試驗(yàn)，其大致過程是：將含有某種細(xì)菌的菌液用稀釋涂布平板法接種在培養(yǎng)基表面并進(jìn)行培養(yǎng)，最終形成單個的菌落；再分別將含有等劑量不同種抗生素的相同大小的圓形濾紙片置于該平板上有菌落的位置，繼續(xù)培養(yǎng)一段時間后，若濾紙片下的菌落死亡，說明該細(xì)菌對該抗生素敏感．（填“敏感”或“不敏感”）
（3）用上述方法統(tǒng)計菌落數(shù)目時，一般選擇菌落在30-300的平板進(jìn)行計數(shù)，在某一稀釋度下平板上的平均菌落數(shù)為50個，所用稀釋液的體積為0.2ml，稀釋倍數(shù)為10⁵時，則每毫升樣品中的菌落數(shù)為2.5×10⁷．在進(jìn)行分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時，A同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個菌落．A同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有①②③（填序號）．
①由于土樣不同　②由于培養(yǎng)基污染　③由于操作失誤　④沒有設(shè)置對照
（4）在篩選纖維素分解菌的過程中，通常用剛果紅染色法，這種方法能夠通過顏色反應(yīng)直接對纖維素分解菌進(jìn)行篩選．甲同學(xué)在實(shí)驗(yàn)時得到了如圖所示的結(jié)果，則纖維素分解菌位于A．
A．③B．①②C．②③D．①②③

Answer 1

分析 1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，其基本過程為計算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板五個步驟．
2、從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株．篩選尿素分解菌應(yīng)該使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，配制培養(yǎng)基的一般操作是配制培養(yǎng)液、調(diào)整pH、分裝、包扎、滅菌、擱置斜面．微生物的計數(shù)常用稀釋涂布平板法接種，采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時，要將培養(yǎng)皿倒置．

解答 解：（1）培養(yǎng)基中的蛋白胨主要為微生物提供碳源、氮源和生長因子．在各種成分溶化后分裝前，必須進(jìn)行的是調(diào)節(jié)pH和滅菌．
（2）臨床使用抗生素前，有時需要進(jìn)行細(xì)菌的耐藥性試驗(yàn)，其大致過程是：將含有某種細(xì)菌的菌液用稀釋涂布平板法接種在培養(yǎng)基表面并進(jìn)行培養(yǎng)，最終形成單個的菌落；再分別將含有等劑量不同種抗生素的相同大小的圓形濾紙片置于該平板上有菌落的位置，繼續(xù)培養(yǎng)一段時間后，若濾紙片下的菌落死亡，說明該細(xì)菌對該抗生素敏感．
（3）（3）微生物的計數(shù)常用稀釋涂布平板法接種，可以獲得單個菌落進(jìn)行統(tǒng)計菌落數(shù)目，通常選擇菌落數(shù)在30～300間的平板進(jìn)行計數(shù)．每毫升樣品中的菌落數(shù)為50÷0.2×10⁵=2.5×10⁷．在進(jìn)行分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時，A同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個菌落．A同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有①由于土樣不同、②由于培養(yǎng)基污染、③由于操作失誤，是否設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)不影響實(shí)驗(yàn)組的菌落數(shù)目．
（4）剛果紅是一種染料，可與纖維素形成紅色復(fù)合物，但不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)，在含有纖維素的培養(yǎng)基上添加剛果紅時，會形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，剛果紅-纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，據(jù)此就可以篩選出纖維素分解菌．據(jù)圖分析：圖中③以纖維素分解菌為中心的透明圈，所以纖維素分解菌位于其內(nèi)，故選：A．
故答案為：
（1）碳源、氮源和生長因子        調(diào)節(jié)pH
（2）稀釋涂布平板        敏感
（3）30-300        2.5×10⁷        ①②③
（4）剛果紅染色       A

點(diǎn)評 本題主要考查微生物的篩選與分離，培養(yǎng)基的制作過程等知識，意在提高學(xué)生對相關(guān)知識點(diǎn)的識記與理解．