Question

4．內(nèi)皮素（ET）是一種含21個(gè)氨基酸的多肽，具有強(qiáng)烈的血管收縮和促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖等作用，其功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯(lián)系．內(nèi)皮素（ET）主要通過(guò)與靶細(xì)胞膜上的ET受體（ETA）結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)．科研人員通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ETA基因在大腸桿菌細(xì)胞中的高效表達(dá)，其過(guò)程如下圖所示，圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaI的識(shí)別序列為，限制酶XhoI的識(shí)別序列為      ．請(qǐng)據(jù)圖分析回答：

（1）進(jìn)行過(guò)程①時(shí)，需要加入緩沖液、引物、脫氧核苷酸和逆轉(zhuǎn)錄酶酶等．完成過(guò)程①②③的目的是獲取目的基因（ETA基因）．
（2）過(guò)程③和⑤中，限制酶XhoI切割DNA，使磷酸二酯鍵鍵斷開(kāi)，形成的黏性末端是．用兩種限制酶切割•獲得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向連接到載體上，以防止目的基因自身環(huán)化_．
（3）構(gòu)建的重組表達(dá)載體，目的基因上游的啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄的部位，進(jìn)而可驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄．除圖中已標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外，基因表達(dá)載體還應(yīng)具有的結(jié)構(gòu)是復(fù)制原點(diǎn)、終止子．
（4）過(guò)程⑥要CaCl₂預(yù)先處理大腸桿菌，使其成為容易吸收外界DNA的感受態(tài)細(xì)胞．
（5）將SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，其目的是有利于檢測(cè)檢測(cè)ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量．
（6）基因工程操作時(shí)可將外源基因整合到葉綠體基因組中，不僅能有效改良植物的品質(zhì)．還由于葉綠體轉(zhuǎn)基因不會(huì)隨花粉（“花粉”或“卵細(xì)胞”）傳給后代，從而在一定程度上避免轉(zhuǎn)基因作物中的外源基因能擴(kuò)散到其他同類作物．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：①②③表示反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因的過(guò)程，④表示構(gòu)建基因表達(dá)載體，⑤表示限制酶切割質(zhì)粒，⑥表示重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，⑦表示目的基因的檢測(cè)．

解答 解：（1）過(guò)程①以mRNA合成目的基因，所以需要加入緩沖液、原料、逆轉(zhuǎn)錄酶和ATP和引物等．過(guò)程①②③表示反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因的過(guò)程．
（2）過(guò)程③和⑤利用限制酶XhoⅠ切割DNA獲得目的基因的過(guò)程，限制酶使得DNA的磷酸二酯鍵斷開(kāi)，形成的黏性末端是．圖中顯示利用了兩種限制酶切割目的基因和載體，從而獲得了不同的黏性末端，可以使目的基因定向連接到載體上，以防止目的基因自身環(huán)化．
（3）目的基因上游的啟動(dòng)子的作用是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄，除圖示結(jié)構(gòu)外，完整的基因表達(dá)載體還應(yīng)具有復(fù)制原點(diǎn)、終止子等結(jié)構(gòu)．
（4）過(guò)程⑥中，要用CaCl₂預(yù)先處理大腸桿菌，使其成為處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)的細(xì)胞．
（5）利用SNAP基因與ET_A基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是檢測(cè)ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量．
（6）基因工程操作時(shí)可將外源基因整合到葉綠體基因組中，不僅能有效改良植物的品質(zhì)．還由于葉綠體轉(zhuǎn)基因不會(huì)隨花粉傳給后代，從而在一定程度上避免轉(zhuǎn)基因作物中的外源基因能擴(kuò)散到其他同類作物．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄酶    獲取目的基因（ETA基因）
（2）磷酸二酯鍵     使目的基因定向連接到載體上，以防止目的基因自身環(huán)化
（3）RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄       復(fù)制原點(diǎn)、終止子 
（4）感受態(tài)
（5）檢測(cè)ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量
（6）花粉

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)圖能力和判斷能力，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，能結(jié)合圖中信息并運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力．