Question

5．為獲得果膠酶高產菌株，科研人員進行了下列分離、篩選、鑒定工作．
（1）為分離果膠酶產生菌，科研人員配制了下表所示成分的培養基，該表空白處的兩種成分是果膠和蒸餾水．制備的培養基常用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌．

K2HPO4	MgSO4	NaNO3	FeSO4		瓊脂
0.1g	0.5g	3g	0.01g	2g	15g	加至1L

（2）科研人員將采集的果園土壤放入無菌水中，震蕩混勻，制成懸液．為獲得較均勻分布的單菌落，還需要將懸液進行梯度稀釋，用稀釋涂布法接種于固體培養基上．接種后的培養基倒置狀態放人培養箱．
（3）選擇單菌落數目適宜的培養基，加入一定濃度的剛果紅溶液（果膠與剛果紅結合后顯紅色），一段時間后洗去培養基表面的剛果紅溶液，觀察并比較菌落水解（或“透明”）直徑的比值，篩選果膠酶高產菌株．
（4）將獲得的菌株進行液體培養后，從培養液的上清液（填“上清液”或“沉淀物”）獲得粗提的果膠酶．將一定量的粗提果膠酶與適量果膠溶液混合，一定時間后測定吸光值來測定酶活性．進行吸光值測定時，需將等量失活的粗提果膠酶與等量果膠溶液混合，作為實驗的對照．

Answer 1

分析 微生物的分離是研究和利用微生物的第一步，也是微生物工作的基本方法和重要環節．土壤中的微生物很多，本題中要從土壤中獲得果膠酶高產菌株．接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．

解答 解：（1）由于實驗目的是分離果膠酶產生菌，所以培養基中需要加入果膠，在配制過程中，需要用蒸餾水先配制成液體培養基，再凝固成固體培養基．制備的培養基常用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌．
（2）為獲得較均勻分布的單菌落，還需要將懸液進行梯度稀釋，并用稀釋涂布法接種于固體培養基上．接種后的培養基倒置狀態放入培養箱，防止培養皿蓋上凝結的水珠落入培養基造成污染．
（3）選擇單菌落數目適宜的培養基，加入一定濃度的剛果紅溶液（果膠與剛果紅結合后顯紅色），一段時間后洗去培養基表面的剛果紅溶液，觀察并比較菌落和水解直徑的比值，篩選果膠酶高產菌株．
（4）將獲得的菌株進行液體培養后，從培養液的上清液獲得粗提的果膠酶．將一定量的粗提果膠酶與適量果膠溶液混合，一定時間后測定吸光值來測定酶活性．進行吸光值測定時，需將等量失活的粗提果膠酶與等量果膠溶液混合，作為實驗的對照．
故答案為：
（1）果膠和蒸餾水    高壓蒸汽滅菌
（2）梯度稀釋    稀釋涂布    倒置
（3）水解（或“透明”）
（4）上清液    等量失活的粗提果膠酶

點評 本題考查分離和培養果膠酶高產菌株的相關知識，意在考查學生的識記能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題和解決問題的能力．