Question

1．肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌．研究人員在體外利用基因工程技術將let-7基因導入肺癌細胞實現表達，發現肺癌細胞的增殖受到抑制，其影響機理如圖，請回答下列問題：
（1）利用基因工程技術抑制肺癌細胞的增殖過程中，還需使用動物細胞培養技術．
（2）獲取let-7基因后欲進行基因擴增應采用PCR技術，其依據的原理是DNA雙鏈復制．
（3）基因表達載體構建過程中需使用的工具有限制性核酸內切酶、DNA連接酶和運載體．將基因表達載體導入肺癌細胞的常用方法是顯微注射法．
（4）根據圖示分析，可從細胞中提取RNA進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉錄．肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中RAS蛋白（RASmRNA/RAS蛋白）含量減少引起的．

Answer 1

分析 根據題意和圖示分析可知：
圖示表示let-7基因影響癌基因RAS的表達的原理，let-7基因轉錄產物miRNA與RAS基因轉錄產物RAS mRNA結合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞增殖受到抑制．

解答 解：（1）在體外利用基因工程技術抑制肺癌細胞的增殖過程中，需將轉基因細胞進行增殖，故需使用動物細胞培養技術．
（2）目的基因擴增常采用PCR技術，其依據的原理是DNA雙鏈復制．
（3）基因表達載體構建過程中需使用核酸內切酶切割目的基因和運載體，后用DNA連接酶形成重組DNA，用運載體作為目的基因的載體．將基因表達載體導入動物細胞的常用方法是顯微注射法．
（4）根據圖示分析，可從細胞中提取RNA進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉錄．let-7轉錄形成的RNA可與RASmRNA形成雙鏈，從而阻止RAS蛋白的表達過程，故肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中RAS蛋白含量減少引起的．

故答案為：
（1）動物細胞培養 
（2）PCR  DNA雙鏈復制 
（3）限制性核酸內切酶、DNA連接酶和運載體  顯微注射法 
（4）RNA   RAS

點評 本題考查基因工程的原理和技術、遺傳信息的轉錄和翻譯的相關知識，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，并能利用圖示信息答題．