Question

8．土壤中含有大量的難溶性磷酸鹽，為了從土壤中篩選出能夠?qū)㈦y溶性磷酸鹽轉(zhuǎn)化為植物能吸收的可溶性磷的優(yōu)良解磷菌株，以便將其添加到有機(jī)肥中，改善植物磷元素供應(yīng)．科研人員進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)：

菌株	透明圈直徑（D）	菌落直徑（d）	D/d
M-3-01	18.8	12.3	1.5
B3-5-6	20.7	8.0	2.6
T1-4-01	9.1	6.5	1.4

實(shí)驗(yàn)原理：固體培養(yǎng)基中難溶性磷酸鹽在微生物的作用下溶解，會(huì)在菌落周圍形成透明圈（如圖1），透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小．
實(shí)驗(yàn)步驟：
步驟1  取某地區(qū)土樣5g制得土壤溶液后稀釋，取稀釋液1mL接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基A上，在適宜溫度下培養(yǎng)72h．
步驟2  在基礎(chǔ)培養(yǎng)基A上用接種環(huán)挑取代表性菌落再次接種，培養(yǎng)3～4d后觀察菌落特征和透明圈的大小，初步篩選出三種優(yōu)良解磷菌株（如表）．
分析回答：
（1）從物理形態(tài)看，培養(yǎng)基A屬于固體培養(yǎng)基．培養(yǎng)基中磷源應(yīng)該是難溶性磷酸鹽．
（2）步驟1中接種方法是稀釋涂布平板法，步驟2中接種環(huán)的滅菌方法是灼燒．
（3）根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以確定溶解磷能力最強(qiáng)的菌株是B3-5-6．
（4）為進(jìn)一步測(cè)定初步篩選的三種菌株實(shí)際溶解磷的能力，研究人員將它們接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基B中，并在37℃、200r•min^-1 搖床培養(yǎng)，定期取上清液，測(cè)定溶液中可溶性磷含量，得到圖2所示曲線．
①用搖床進(jìn)行培養(yǎng)的好處是增加培養(yǎng)液中的溶氧量；使菌株與培養(yǎng)液充分接觸，有利于物質(zhì)的交換．
②結(jié)果表明最優(yōu)良的解磷菌株是M-3-01．

Answer 1

分析 1、消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對(duì)象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
3、分析表格：B3-5-6形成的透明圈最大，說明其溶解磷能力最強(qiáng)．

解答 解：（1）菌落只有在固體培養(yǎng)基上才能形成（培養(yǎng)過程中菌體不能運(yùn)動(dòng)）；要篩選溶解難溶性磷能力強(qiáng)的菌株，必須以難溶性磷酸鹽作為唯一磷源．
（2）步驟1的目的是從土壤微生物中篩選解磷微生物，由于土壤樣液中微生物種類和數(shù)量多，因此，最好采用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種（如果用平板劃線法，則有可能不能將全部種類的微生物進(jìn)行接種，當(dāng)然本題步驟1中“取稀釋液1mL接種”也暗示接種方法是稀釋涂布平板法）．
（3）接種環(huán)滅菌方法是灼燒，涂布器的滅菌方法是先將涂布器侵入酒精中，再將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃．
（4）根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理中“透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小”，結(jié)合表格數(shù)據(jù)可以確定溶解磷能力最強(qiáng)的菌株是B3-5-6．
（5）搖床培養(yǎng)時(shí)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)需氧微生物常用的方法，使用搖床培養(yǎng)，不僅可以增大培養(yǎng)液中溶氧量，促進(jìn)微生物的有氧呼吸，而且能夠增加菌體與培養(yǎng)液的接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率．
（6）根據(jù)實(shí)驗(yàn)曲線圖，不難看出M-3-01實(shí)際溶解磷能力最強(qiáng)．
故答案為：
（1）固體   難溶性磷酸鹽   
（2）稀釋涂布平板法   灼燒  
（3）B3-5-6   
（4）①增加培養(yǎng)液中的溶氧量；使菌株與培養(yǎng)液充分接觸，有利于物質(zhì)的交換    ②M-3-01

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖和表格，考查微生物的培養(yǎng)和分離，要求考生識(shí)記接種微生物常用的兩種方法及無菌技術(shù)；能根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理及實(shí)驗(yàn)結(jié)果答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．