Question

11．下面是對大腸桿菌進行數量測定的實驗，請回答有關問題．步驟如下：
A．制備稀釋倍數為10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶的系列稀釋液．
B．如圖是采用純化酵母菌培養的兩種接種方法接種后培養的效果圖．

（1）對大腸桿菌進行數量測定選用圖[A]稀釋涂布平板法接種樣品．
C．適宜溫度下培養．
結果分析：
（2）測定的大腸桿菌數，在對應稀釋倍數為10⁶的培養基中，得到以下幾種統計結果，正確可信的是D
A．一個平板，統計的菌落數是53
B．兩個平板，統計的菌落數是12和78，取平均值45
C．三個平板，統計的菌落數分別是5、85和60，取平均值50
D．四個平板，統計的菌落數分別是44、31、64和55，取平均值48.5
（3）一同學在稀釋倍數為10⁵的培養基中測得平板上菌落數的平均值為43.4，那么每毫升樣品中的菌落數是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1mL）43.4×10⁷．
（4）用這種方法測定密度，實際活菌數量要比測得的數量多，因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落．
（5）某同學在測定大腸桿菌的密度時發現，在培養基上還有其他雜菌的菌落，能否肯定該大腸桿菌的品系被污染了？不能，為什么？因為不能排除雜菌來自培養基或來自培養過程．

Answer 1

分析 1、平板劃線法是接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的造作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基表面，在數次劃線之后培養，可以分離到由一個細胞繁殖而來的子細胞群體-菌落；稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列梯度稀釋，然后將不同梯度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基上，進行培養獲得由單細胞繁殖而來的菌落．
2、對微生物進行分離、計數常用的接種方法是稀釋涂布平板法，估算每毫升樣品中的細菌數時，往往選取30～300的平板，取至少三個平板的平均值，每毫升樣品中的細菌數=（平板的平均菌落數÷涂布的體積）×稀釋的倍數；由于當兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察的是一個菌落，因此估算的菌落數少于實際菌落數．
3、微生物培養過程中要嚴格遵循無菌操作．

解答 解：（1）測量大腸桿菌數量常用的接種方法是稀釋涂布平板法，即圖中的A．
（2）分析選項可知，D選項中四個平板的每個平板的菌落數在30～300之間，且非常接近，因此D選項的結果最可靠．
（3）每毫升樣品中的細菌數是=（平板的平均菌落數÷涂布的體積）×稀釋的倍數=（43.4÷0.1）×10⁵=34.34×10⁷個．
（4）由于當兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察的是一個菌落，因此實際菌落數多于估算的菌落數．
（5）某同學在測定大腸桿菌的密度時發現，在培養基上還有其他雜菌的菌落，不能確定大腸桿菌品系被污染，也可能是培養基被污染或接種過程沒有嚴格按照無菌技術進行操作或培養過程污染．
故答案為：
（1）A  稀釋涂布平板法
（2）D
（3）43.4×10⁷
（4）多    當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落
（5）不能   因為不能排除雜菌來自培養基或來自培養過程

點評 本題的知識點是微生物培養過程，分離微生物和統計活菌數常用的常用方法，主要考查學生設計和完善實驗步驟，分析實驗結果獲取結論的能力和提出問題進行進一步探究的能力，利用所學的微生物知識解決生活問題的能力．