Question

9．根據基因工程的有關知識，回答下列問題：
（1）限制性內切酶切割DNA分子后產生的片段，其末端類型有黏性末端和平末端．
（2）質粒運載體用EcoRⅠ切割后產生的片段如圖：為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性內切酶切割，該酶必須具有的特點是切割產生的DNA片段末端與EcoRI切割產生的相同．
（3）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩項，即E•coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶．
（4）反轉錄作用的模板是mRNA（或RNA）．
（5）若用重組質粒轉化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是未處理的大腸桿菌吸收質粒（外源DNA）的能力極弱．

Answer 1

分析 基因工程的工具：
（1）限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（2）DNA連接酶：DNA連接酶分為兩類：E．coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶，連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（3）運載體：常用的運載體：質粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒．

解答 解：（1）經限制性核酸內切酶切割后能形成兩種類型的末端，即平末端和黏性末端．
（2）為了便于相連，兩種不同限制酶切割之后所產生的黏性末端必須相同．
（3）DNA連接酶分為兩類：E．coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶．這二者都能連接黏性末端，此外T₄DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時的效率比較低．
（4）反轉錄是以mRNA為模板逆轉錄先合成單鏈DNA，再合成雙鏈DNA．
（5）當受體細胞是細菌時，為了增大導入的成功率，常用Ca²⁺處理，得到感受態細胞，此時細胞壁和細胞膜的通透性增大，容易吸收重組質粒．而未處理的大腸桿菌吸收質粒（外源DNA）的能力極弱．
故答案為：
（1）黏性末端   平末端
（2）切割產生的DNA片段末端與EcoRI切割產生的相同
（3）T₄
（4）mRNA（或RNA）  
（5）吸收質粒（外源DNA）的能力極弱

點評 本題考查基因工程的相關知識，重點考查基因工程的工具，只要考生識記基因工程三種工具的相關知識即可，屬于考綱識記層次的考查，這需要考生在平時的學習過程中構建相關知識網絡結構．