Question

19．人血清白蛋白是一種在醫學上應用廣泛、需求量大的蛋白質藥物．而目前血漿提取生產的方式難以滿足市場的要求，用基因工程方法生產人血清白蛋白無疑具有巨大的商業價值．畢赤酵母菌由于具有增殖快、易培養等優點，使得其在表達外源蛋白中具有突出的優勢．
（1）若從cDNA文庫獲取人血清白蛋白基因，則需要從能夠表達人血清白蛋白基因的細胞中提取mnRNA分子，再通過反轉錄過程獲得cDNA文摩，從中獲得目的基因；在構建基因表達載體時，目的基因前后還應分別加上啟動子和終止子，否則會影響目的基因的轉錄．
（2）目的基因導入酵母菌之前，一般先用鈣離子處理酵母菌使之成為感受態細胞，其原因是感受態細胞能夠吸收周圍環境中DNA分子．
（3）人血清白蛋白基因進入酵母細胞內，能夠維持穩定和表達的過程稱為轉化；若要檢測酵母菌細
胞內是否存在目的基因，通常采用的檢測方法是DNA分子雜交技術：要檢測酵母菌是否生產人
血清白蛋白，采用抗原一抗體雜交，若有雜交帶出現，表明已表達出人血清白蛋白．

Answer 1

分析 1、將目的基因導入微生物細胞：原核生物作為受體細胞的原因是繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少，最常用的原核細胞是大腸桿菌，其轉化方法是：先用 Ca²⁺處理細胞，使其成為感受態細胞，再將重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態細胞混合，在一定的溫度下促進感受態細胞吸收DNA分子，完成轉化過程．
2、目的基因的檢測和鑒定：
（1）分子水平上的檢測  
①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術
②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術
③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術
（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）若從cDNA文庫獲取人血清白蛋白基因，則需要從能夠表達人血清白蛋白基因的細胞中提取mRNA分子，再通過反轉錄過程獲得cDNA文庫，從中獲得目的基因；在構建基因表達載體時，目的基因前后還應分別加上啟動子和終止子，否則會影響目的基因的轉錄．
（2）目的基因導入酵母菌之前，一般先用鈣離子處理酵母菌使之成為感受態細胞，其原因是感受態細胞能夠吸收周圍環境中DNA分子．
（3）轉化是指目的基因進人受體細胞內，并在受體細胞內維持穩定和表達的過程．若要檢測酵母菌細胞內是否存在目的基因，通常采用的檢測方法是DNA分子雜交技術：要檢測酵母菌是否生產人血清白蛋白，采用抗原一抗體雜交，若有雜交帶出現，表明已表達出人血清白蛋白．
故答案為：
（1）反轉錄   啟動子   終止子
（2）鈣離子     吸收周圍環境中DNA分子
（3）轉化    DNA分子雜交   雜交帶

點評 本題考查了基因工程的有關知識，要求考生能夠識掌握因工程的操作步驟，識記基因表達載體的組成以及其中啟動子和終止子的作用，識記目的基因導入微生物細胞的方法，掌握目的基因檢測與鑒定的方法．