Question

14．土壤微生物分離培養技術在微生物環境功能研究、代謝途徑的闡明、特定功能的驗證等方面發揮著重要作用．研究者可以通過培養基的優化和重新設計來達到分離土壤微生物的目的．以土壤中分解尿素的細菌的分離與計數為例，回答下列問題：
（1）為達到分離的目的，培養基的成分必須以尿素為唯一氮源．制作固體培養基時需加入瓊脂作為凝固劑．為方便計數，可用稀釋涂布平板法接種．
（2）在使用同一土壤樣品和培養基已滅菌的情況下，甲同學從對應10⁴倍稀釋的培養基中篩選出約200個菌落，而其他同學篩選出約50個菌落，請分析甲同學篩選出菌落較多的原因：雜菌污染、無菌操作不當．（寫出兩個原因）．
（3）在細菌分解尿素的反應中，細菌產生的脲酶可將尿素分解成為氨．為進一步分離得到的細菌是否可以分解尿素，可在培養基中加入酚紅指示劑，若該指示劑變紅，則可初步鑒定該細菌可以分解尿素．

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落．
2、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數：
（1）實驗室中目的菌株的篩選
①原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養、溫度．pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長．
培養基選擇分解尿素的微生物的原理：培養基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發育繁殖，而受到抑制，所以用此培養基就能夠選擇出分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的細菌才能分解尿素．配制以尿素為唯一氮源的培養基，能夠生長的細菌就是能分解尿素的細菌．

解答 解：（1）要從土壤中分解尿素的細菌，培養基的成分必須以尿素為唯一氮源．制作固體培養基時需加入瓊脂作為凝固劑．為方便計數，可用稀釋涂布平板法接種．
（2）在使用同一土壤樣品和培養基已滅菌的情況下，甲同學從對應10⁴倍稀釋的培養基中篩選出約200個菌落，而其他同學篩選出約50個菌落，則甲同學篩選出菌落較多的原因可能是雜菌污染、無菌操作不當等．
（3）在細菌分解尿素的反應中，細菌產生的脲酶可將尿素分解成為氨．為進一步分離得到的細菌是否可以分解尿素，可在培養基中加入酚紅指示劑，若該指示劑變紅，則可初步鑒定該細菌可以分解尿素．
故答案為：
（1）唯一氮源     瓊脂     稀釋涂布平板
（2）雜菌污染、無菌操作不當
（3）脲    酚紅     變紅

點評 本題考查微生物的分離和培養，要求考生識記培養的成分、種類及功能；識記接種微生物常用的兩種方法；識記分離分解尿素的細菌的原理，能結合所學的知識準確答題．