Question

5．尿素是一種重要的農業氮肥，不能直接被農作物吸收，只有當土壤中的微生物將尿素分解后才能被植物吸收利用．因此，對土壤中分解尿素的微生物進行分離和鑒定具有重要意義．
回答下列問題：
（1）對土壤中分解尿素的微生物的分離過程如下：
第一步：土壤取樣．取土樣用的工具和盛土樣的信封等在使用前都需要滅菌（填“消毒”或“滅菌”）．
第二步：樣品稀釋．通常分離不同種類的微生物要采用不同的稀釋度，原因是土壤中不同生物的數量不同．
第三步：微生物的培養與觀察．將一定稀釋度的樣品接種在以尿素為唯一氮源的培養基上，并在適宜的條件下培養．分解尿素的微生物能在該培養基上生長繁殖，而不能利用尿素的微生物則不能生長繁殖．（注：實驗中所用的培養基經檢測符合要求，且均在無菌條件下操作）
（2）若對土壤懸液進行梯度稀釋時，未經振蕩而直接取上層懸液進行梯度稀釋，用稀釋倍數為10⁴的樣液涂布到平板上進行培養和計數，統計出的菌落數往往比正確操作統計出的菌落數偏高．
（3）對土壤中分解尿素的微生物作進一步的鑒定

成分	KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4•7H2O	酚紅指示劑	尿素	蒸餾水
培養基（含量）	1.4g	2.1g	0.2g	0.01g	1.0g	1000mL

若要對上述初步篩選出的分解尿素的微生物作進一步的鑒定，需在上表培養基配方中添加的物質是葡萄糖、瓊脂．若分離得到的是尿素分解菌，則培養基中pH升高使酚紅指示劑變為紅色，pH升高的原因是尿素分解菌合成的酮酶將尿素分解成氨．
（4）分解尿素的微生物在生態系統中的作用是將有機物分解為無機物（將尿素分解為氨）．

Answer 1

分析 1、分離分解尿素的微生物的實驗流程包括：土壤取樣、梯度稀釋、選擇樣品涂布到培養基上、挑選單菌落．
2、滅菌的方法主要有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌．灼燒滅菌適合于接種工具的滅菌，一般來說是在操作過程中金屬類的接種工具．干熱滅菌適合于玻璃器皿、金屬工具的滅菌．高壓蒸汽滅菌適合于玻璃器皿、接種工具以及培養基．特別注意培養基的滅菌只能用高壓蒸汽滅菌．

解答 解：（1）取土樣用的工具和盛土樣的信封等在使用前都需要滅菌．
由于土壤中不同生物的數量不同，因此分離不同種類的微生物要采用不同的稀釋度．
將一定稀釋度的樣品接種在以尿素為唯一氮源的培養基上，并在適宜的條件下培養．分解尿素的微生物能在該培養基上生長繁殖，而不能利用尿素的微生物則不能生長繁殖．
（2）若對土壤懸液進行梯度稀釋時，未經振蕩而直接取上層懸液進行梯度稀釋．由于此種細菌屬于需氧型細菌，主要分布在上層培養液匯總，因此用稀釋倍數為10⁴的樣液涂布到平板上進行培養和計數，統計出的菌落數往往比正確操作統計出的菌落數偏高．
（3）對土壤中分解尿素的微生物作進一步的鑒定．培養基的成分應包括碳源、氮源、水和無機鹽等．若要對上述初步篩選出的分解尿素的微生物作進一步的鑒定，需在上表培養基配方中添加的物質是葡萄糖（作為碳源）、瓊脂（固體培養基中的凝固劑）．若分離得到的是尿素分解菌，則培養基中pH升高使酚紅指示劑變為紅色，pH升高的原因是尿素分解菌合成的酮酶將尿素分解成氨．
（4）分解尿素的微生物在生態系統中的作用是將有機物分解為無機物（將尿素分解為氨）．
故答案為：
（1）滅菌  土壤中不同生物的數量不同   不能利用尿素的微生物
（2）偏高
（3）葡萄糖   瓊脂  尿素分解菌合成的酮酶將尿素分解成氨
（4）將有機物分解為無機物（將尿素分解為氨）

點評 本題主要考查微生物的培養與應用的相關問題，利用選擇培養基篩選出分解纖維素菌，其中涉及培養基和接種環常采用的滅菌方法的區別，明確選擇培養基、各種儀器材料的滅菌方法．