Question

9．草甘膦的除草機制是抑制植物體內EPSPS酶的合成，最終導致植物死亡．但它的使用有時也會影響到農作物的正常生長．目前，已發現可以從一種抗草甘膦的大腸桿菌突變株中分離出EPSPS基因，若將該基因轉入農作物植物細胞內，從而獲得的轉基因植物就能耐受高濃度的草甘膦．
（1）將圖1①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反應管中有4種DNA片段．

（2）假設圖1中質粒原來BamHⅠ識別位點的堿基序列變為了另一種限制酶BclⅠ的堿基序列，現用BclⅠ和HindⅢ切割質粒，則該圖1中①的DNA右側還能選擇BamHⅠ進行切割，并獲得所需重組質粒嗎？能 請說明理由切割后露出的黏性末端相同．
（3）若上述假設成立，并成功形成重組質粒，則重組質粒D
A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切開      B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切開
C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切開  D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切開
（4）要想檢測導入的EPSPS基因是否表達，在分子水平上可用抗原-抗體雜交方法進行檢測．

Answer 1

分析 1、“分子手術刀”--限制性核酸內切酶（限制酶）
（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的．
（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．
（3）結果：經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端．
2．“分子縫合針”--DNA連接酶
（1）根據酶的來源不同分為兩類：E．coliDNA連接酶、T₄DNA連接酶．
（2）DNA連接酶連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．

解答 解：（1）圖①中，從蘇云金桿菌的DNA被HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后形成3種DNA片段．而質粒被HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后形成2種DNA片段，其中有1種與目的基因相同，所以反應管中有4種DNA片段．
（2）據圖分析，由于BamHⅠ和BclⅠ切割DNA后露出的黏性末端相同，質粒原來BamHⅠ識別位點的堿基序列變為限制酶BclⅠ的堿基序列，用BclⅠ和HindⅢ切割質粒，用BamHⅠ和HindⅢ切割目的基因，仍能獲得重組質粒．（3）根據酶切位點和識別的堿基序列可知，重組質粒只能被能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切開．（4）圖中②過程所用的酶為DNA連接酶，作用部位為兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（4）檢測目的基因是否在受體細胞內表達的分子水平上的檢測是向分泌物中加入抗體，通過抗原-抗體特異性結合形成雜交帶加以檢測，如果能形成說明表達，如果不能形成說明沒有表達．
故答案為：
（1）4
（2）能    切割后露出的黏性末端相同
（3）D
（4）抗原-抗體雜交

點評 本題以轉Bt毒素蛋白基因植物的培育過程示意圖為載體，考查基因工程的相關知識，意在考查考生的識圖能力、理解能力和應用能力，屬于中等難度題．