Question

10．人類有許多疾病是由細(xì)菌或病毒導(dǎo)致的．因此水在飲用前的檢驗是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施，請回答下列有關(guān)問題：
（1）檢驗大腸桿菌的含量時，通常將水樣進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為稀釋涂布平板法，所用的培養(yǎng)基需要滅菌，其常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌．
（2）用該方法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時是否需要設(shè)置對照組？需要設(shè)置（對照組）為什么？因為需要判定培養(yǎng)基是否被雜菌污染（培養(yǎng)基滅菌是否合格）．
（3）如分別取0.1mL已稀釋103倍的水樣分別涂布到三個瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，培養(yǎng)基記錄到大腸桿菌的菌落數(shù)分別為55、56、57，則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為5.6×10⁸個．
（4）已知大腸桿菌能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，現(xiàn)提供足量的已滅菌的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液和具塞試管，應(yīng)如何判斷待檢水樣中是否含有大腸桿菌通過無菌操作向試管內(nèi)注入一定量待檢水樣，再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液將試管充滿，塞上塞子，混勻后置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24h．試管內(nèi)有氣泡生成的說明水樣中有大腸桿菌．
（5）某致病病毒的遺傳物質(zhì)是DNA，但是病毒DNA極少，這時可以通過PCR技術(shù)擴增病毒DNA片段，然后進行檢測．采用這種技術(shù)進行DNA擴增時，一定需要用到的酶是耐高溫的DNA聚合酶．

Answer 1

分析 1、稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列梯度稀釋，然后將不同梯度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上，進行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液離，聚集在一起的微生物被分散成單個細(xì)胞，從而獲得由單細(xì)胞繁殖而來的菌落．
2、對微生物進行分離、計數(shù)常用的接種方法是稀釋涂布平板法，估算每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)時，往往選取30～300的平板，取至少三個平板的平均值，每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)=（平板的平均菌落數(shù)÷涂布的體積）×稀釋的倍數(shù)．

解答 解：（1）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．所用的培養(yǎng)基需要滅菌，其常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌．
（2）由于需要判斷培養(yǎng)基是否被污染，所以用該方法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時需要設(shè)置對照組．
（3）如分別取0.1mL已稀釋10³倍的水樣分別涂布到三個瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，培養(yǎng)基記錄到大腸桿菌的菌落數(shù)分別為55、56、57，則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)=（55+56+57）÷3×10³÷0.1×10³=5.6×10⁸個．
（4）判斷待檢水樣中是否含有大腸桿菌，可以通過無菌操作向試管內(nèi)注入一定量待檢水樣，再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液將試管充滿，塞上塞子，混勻后置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24h．試管內(nèi)有氣泡生成的說明水樣中有大腸桿菌．
（5）某致病病毒的遺傳物質(zhì)是DNA，但是病毒DNA極少，這時可以通過PCR技術(shù)擴增病毒DNA片段，然后進行檢測．采用這種技術(shù)進行DNA擴增時，一定需要用到的酶是耐高溫的DNA聚合酶．
故答案為：
（1）稀釋涂布平板法　高壓蒸汽滅菌
（2）需要設(shè)置（對照組）　 因為需要判定培養(yǎng)基是否被雜菌污染（培養(yǎng)基滅菌是否合格）
（3）5.6×10⁸個
（4）通過無菌操作向試管內(nèi)注入一定量待檢水樣，再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液將試管充滿，塞上塞子，混勻后置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24 h．試管內(nèi)有氣泡生成的說明水樣中有大腸桿菌
（5）PCR　 耐高溫的DNA聚合酶

點評 本題旨在考查微生物的分離和培養(yǎng)、某種微生物數(shù)量的測定和培養(yǎng)基對微生物的選擇利用，意在考查具備驗證簡單生物學(xué)事實的能力，并能對實驗現(xiàn)象和結(jié)果進行解釋、分析和處理，具有對一些生物學(xué)問題進行初步探究的能力．