Question

2．某種工業生產中會產生一些含碳有機廢水（含氮量極少），某細菌X在該種生物處理廢水中能發揮很大作用，現要對其進行篩選．

培養液	NaNO3	牛肉膏	K2HPO4	MgSO4•7H2O	KCl	NiSO4
A	-	-	1g/L	1g/L	0.5g/L	0.01g/L
B	3g/L	3g/L	1g/L	1g/L	0.5g/L	0.01g/L
C	3g/L	-	1g/L	1g/L	0.5g/L	0.01g/L

（1）應選用上表中的C（填圖中字母）培養液，解釋不選用其他培養液的原因：①A培養基中缺乏氮源，②B培養基中含有機廢水以外的碳源．
（2）接種前培養基必須進行高壓蒸汽滅菌，為確定培養基滅菌是否徹底，可設置不加入廢水（或未接種或加入等量無菌水）的培養基為對照組；若要制作平板，常在培養液中加入瓊脂作為凝固劑．對獲得的目的菌種，可采用甘油管藏法，長期保存．
（3）為獲得單個菌落，某同學將細菌X接種到正確的培養基中，經培養后，其中一個平板的菌落分布如圖所示，該同學的接種方法是稀釋涂布平板法，所用的主要接種工具是涂布器，該同學可能的操作失誤是涂布不均勻．
（4）對細菌X計數時，可吸取菌液1mL稀釋1000倍，然后吸取稀釋后的菌液0.2mL，接種于平板上培養，一段時間后觀察到三個平板上的菌落數為61、62、63，則該菌液中的細菌X數量約為3.1×10⁵個/mL．

Answer 1

分析 篩選和分離微生物的一般步驟是：樣品取樣、選擇培養、梯度稀釋、涂布培養和篩選菌株．在此過程中通常需要使用選擇培養基．篩選和分離污水中的細菌X需要使用以污水為唯一碳源的選擇培養基

解答 解：（1）據表分析，A培養基中缺乏氮源，B培養基中含有機廢水以外的碳源，所以不能篩選細菌X，而培養基C是以污水為唯一碳源的選擇培養基，所以可以使用C培養基篩選X細菌．
（2）培養基通常使用高壓蒸汽滅菌法滅菌；為確定培養基滅菌是否徹底，可設置不加入廢水（或加入等量蒸餾水）空白培養基為對照組；固體培養基制作時需要在培養基中加入瓊脂作為凝固劑．菌種的長期保存需要使用甘油管藏法．
（3）據圖分析，圖中的單菌落的獲得的接種方法是進行稀釋涂布平板法．所用的接種工具是涂布器，該同學可能的操作失誤是涂布不均勻倒置菌落分布不均勻．
（4）根據題意可知，該菌液中的細菌X數量約為（61+62+63）÷3÷0.2×1000=3.1×10⁵個/ml．
故答案為：
（1）C  A培養基中缺乏氮源  B培養基中含有機廢水以外的碳源（后兩空可交換順序）
（2）高壓蒸汽  不加入廢水（或未接種或加入等量無菌水）  瓊脂  甘油管藏
（3）稀釋涂布平板法  涂布器  涂布不均勻
（4）3.1×10⁵

點評 本題主要考查微生物的篩選與分離及微生物的實驗室培養，意在強化學生對微生物的篩選與培養的相關知識的理解與運用．