Question

【題目】單寧酶是一類能夠水解單寧酸生成沒食子酸和葡萄糖的水解酶，其可應用于鮮柿脫澀處理，可消除其中的苦澀味。

注：①選擇培養基成分：蔗糖、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、瓊脂、單寧酸、溴酚藍

②溴酚藍在單寧酸環境中為藍紫色，在沒食子酸環境中為黃色

（1）菌種的分離篩選

將從柿子果園所取的土樣置于富集培養液的三角瓶中，30℃、搖床培養48h。稀釋適量倍數后，采用________法接種于選擇培養基上。根據選擇培養基的_________________（現象）作為挑取單寧酶產生菌的標志。

（2）粗酶液制備

向培養菌種的三角瓶中按照培養基體積:緩沖液體積=1:1的量加入pH=5.0的檸檬酸檸檬酸鈉緩沖液，在28℃條件下搖床震蕩，用定性濾紙過濾，所得濾液即為粗酶液。

檸檬酸-檸檬酸鈉的作用是____________________。

請寫出一種純化得到單寧酶的方法及其原理_______________。

（3）酶活力測定

從生物體提取出的酶首先要檢測酶的活力，以便更好地將酶用于生產實踐，該酶活性大小的表示方法是_____________。在鮮柿脫澀的過程中，為了使酶能夠被反復利用，可采用______________技術。

Answer 1

【答案】稀釋涂布平板法 黃色圈（變色圈）直徑的大小 作為緩沖溶液，抵制外界的酸和堿對溶液PH的影響，維持PH基本不變 凝膠色譜法 根據蛋白質分子之間分子大小、吸附性質等差異進行純化（或電泳法 根據蛋白質之間電荷，分子大小等差異進行純化）（或透析法 根據蛋白質之間分子大小差異進行純化） 單位時間內單寧的降解量（或沒食子酸或葡萄糖的生產量） 固定化酶（固定化細胞）

【解析】

微生物的篩選需要使用選擇培養基，進行稀釋時需要無菌水；對微生物進行鑒定時還需要加入鑒別的指示劑；接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。據此分析作答。

（1）稀釋適量倍數后，接種到選擇培養基的方法為稀釋涂布平板法；由題干信息知“單寧酶能夠水解單寧酸生成沒食子酸和葡萄糖”且“溴酚藍在單寧酸環境中為藍紫色，在沒食子酸環境中為黃色”，若存在單寧酶，則會從藍紫色變為黃色，故可根據黃色圈（變色圈）直徑的大小作為挑取單寧酶產生菌的標志。

（2）本實驗中檸檬酸檸檬酸鈉的作用是作為緩沖溶液，抵制外界的酸和堿對溶液PH的影響，維持PH基本不變；可用凝膠色譜法對單寧酶進行純化，實驗原理是根據蛋白質分子之間分子大小、吸附性質等差異進行純化。（或電泳法：根據蛋白質之間電荷，分子大小等差異進行純化）（或透析法：根據蛋白質之間分子大小差異進行純化）

（3）“單寧酶是一類能夠水解單寧酸生成沒食子酸和葡萄糖的水解酶”，故該酶活性的大小可用單位時間內單寧的降解量（或沒食子酸或葡萄糖的生產量）表示；固定化酶等技術使酶能夠重復利用，而且還能提高產品的品質。