Question

如圖圖一是利用基因工程生產人胰島素的主要流程圖，圖二是生產過程中所制備的帶有目的基因供體DNA分子及運載體（質粒）的示意圖．箭頭所指為相應限制性核酸內切酶的識別位點，Tet^r表示四環素抗性基因，Tet^r上游有基因C，基因C的表達產物會阻斷Tet^r基因的表達．請回答下列問題：

（1）第②步中需要的酶是

 

，第④步常用的方法是

 

．
（2）若圖一所示的過程中以Tet^r為標記基因，則第③中應選用

 

對

 

進行切割，再用DNA連接酶連接，連接的化學鍵是

 

．為檢測轉化結果，將經第④步處理后的土壤農桿菌培養液接種在含有

 

培養基上，長出的菌落就是成功插入目的基因的菌落．
（3）第⑥步中經脫分化形成的愈傷組織細胞的特點是

 

，檢驗目的基因在煙草細胞中是否成功表達的方法為

 

．

Answer 1

考點：基因工程的應用

專題：

分析：1、圖一是利用基因工程生產人胰島素過程，①過程獲取的單鏈核酸是RNA，②是逆轉錄獲得DNA過程，③是基因表達載體的構建，④是利用Ca²⁺轉化法將目的基因導入農桿菌，⑤是將農桿菌侵染煙草細胞，⑥是植物組織培養獲得轉基因植株．
2、圖二中基因C有兩個切割位點Bg1Ⅰ、HindⅢ，人胰島素基因兩端也有Bg1Ⅰ、HindⅢ切割位點，可用Bg1Ⅰ、HindⅢ兩種酶獲取目的基因．如選用SmaⅠ切割則不能破壞基因C的作用．

解答： 解：（1）逆轉錄過程獲得DNA需要逆轉錄酶和DNA聚合酶，將目的基因導入細菌的方法是鈣離子轉化法．
（2）由于基因C的表達產物會阻斷Tet^r基因表達，所以需要破壞基因C但不能破壞Tet^r基因，所以選用Bg1Ⅰ、HindⅢ進行切割．DNA連接酶連接的化學鍵是磷酸二酯鍵．標記基因是四環素抗性基因，所以在含有四環素的培養基上培養農桿菌．
（3）愈傷組織細胞的特點是具有分生能力的薄壁細胞，檢驗目的基因在煙草細胞中是否成功表達的方法是抗原-抗體雜交．
答案：（1）逆轉錄酶和DNA聚合酶   鈣離子轉化法 
（2）Bg1Ⅰ、HindⅢ人胰島素基因和質粒   磷酸二酯鍵   四環素
（3）具有分生能力的薄壁細胞    抗原-抗體雜交

點評：本題考查基因工程，解題關鍵：①理解基因工程操作過程．②能理解題意“基因C”的作用和 基因表達載體的構建方法．