Question

5．為了提高乙肝疫苗的預防效果，科學家們對于該疫苗的研發過程做如下的改進：提取乙肝病毒（HBV）基因重組后，與β-半乳糖苷酶基因結合，形成重組質粒BPT（如圖 1），隨后的操作如圖2，請回答下列問題：

（1）在圖一中B（A/B）插入終止子．啟動子是與RNA聚合酶識別和結合的位點，控制轉錄的開始．
（2）從大腸桿菌中提取融合蛋白P-BPT仍需進一步修飾、純化．其主要原因是因為大腸桿菌不具備內質網、高爾基體（細胞器）．
（3）實驗中抽取小鼠脾的淋巴細胞進行細胞培養，培養基的pH控制在7.2-7.4．從分子水平上使用抗原-抗體雜交方法對特異性免疫應答結果進行檢測．

Answer 1

分析 DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
目的基因的檢測與鑒定：探針--用放射性同位素（或熒光分子）標記的含有目的基因DNA片段．
1．分子水平上的檢測：
①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術
②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術
③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術
2．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）根據題意可知，提取乙肝病毒（HBV）基因重組后，與β-半乳糖苷酶基因結合，啟動子在組合基因的首端，控制基因轉錄的開始，終止子在組合基因的末端，即插入B點，從而終止基因的轉錄．
（2）真核細胞中，分泌蛋白的合成與分泌過程：核糖體合成蛋白質→內質網進行粗加工→高爾基體進行再加工→細胞膜，而原核細胞中只有核糖體一種細胞器，即大腸桿菌中沒有內質網和高爾基體，不能對該蛋白質進一步修飾、純化．
（3）在動物細胞培養的過程中，培養基的pH應該控制在7.2-7.4．從分子水平上使用抗原-抗體雜交對特異性免疫應答結果進行檢測．
故答案為：
（1）B 轉錄
（2）內質網、高爾基體
（3）7.2-7.4    抗原-抗體雜交

點評 本題考查基因工程和細胞工程的有關知識，要求考生能夠識記基因工程的工具酶；理解基因表達載體中啟動子和終止子的功能；識記原核細胞和真核細胞結構的異同點，掌握與分泌蛋白形成有關的細胞器等，再結合所學知識準確答題．