Question

12．資料甲：某種細菌體內有抗蟲基因，該基因能指導抗蟲毒蛋白的合成．我國科學家成功地將該抗蟲基因導入棉花細胞中，培育出了抗蟲效果好的棉花新品種．
資料乙：研究表明，抗H蛋白單克隆抗體能抑制過量表達H蛋白的乳腺癌細胞的生長，科學家利用小鼠制備出了抗H蛋白的單克隆抗體．
請回答下列問題：
（1）資料甲中，獲取抗蟲基因時可使用EcoRI，其原因是含抗蟲基因的DNA片段中含有EcoRI能夠識別的特定的核苷酸序列．向棉花細胞導入抗蟲基因時，我國科學家采用了花粉管通道法．抗蟲基因導入棉花細胞后，為確定棉花植株是否具有抗蟲特性以及抗性的程度如何，需要做抗蟲的接種實驗進行個體水平的鑒定．
（2）資料乙中，選擇H蛋白作為單克隆抗體的作用靶點，是因為H蛋白在成年個體的正常組織細胞中低表達（填“低表達”或“高表達”）．將H蛋白注射到小鼠體內，從該小鼠的脾臟中獲得相應的B淋巴細胞，將其與骨髓瘤細胞進行融合，細胞融合利用的原理是細胞膜具有流動性．與植物原生質體融合過程相比，該融合過程特有的誘導方法是用滅活的病毒處理．在雜交瘤細胞的體外培養過程中，培養液中是否需要添加血清需要（填“需要”或“不需要”）；培養箱中充入5% CO₂的主要作是維持培養液（適宜）的pH．為避免培養過程中代謝產物對雜交瘤細胞的毒害，常采取的措施是定期更換培養液（基）．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）EcoRI為一種限制酶，能夠識別的特定的核苷酸序列（GAATTC）并在特定的位點上進行切割，而含抗蟲基因的DNA片段中含有EcoRI的識別序列和切割位點，因此獲取抗蟲基因時可使用EcoRI．向棉花細胞導入抗蟲基因時，我國科學家采用了花粉管通道法．為確定棉花植株是否具有抗蟲特性以及抗性的程度如何，在個體水平上需進行抗蟲的接種實驗．
（2）由題意“抗H蛋白單克隆抗體能抑制過量表達H蛋白的乳腺癌細胞的生長”可推知：H蛋白在成年個體的正常組織細胞中低表達．動物細胞進行融合的原理是細胞膜具有流動性，與植物原生質體融合過程相比，該融合過程特有的誘導方法是用滅活的病毒處理．由于人們對動物細胞所需要的營養物質沒有完全搞清楚，因此在雜交瘤細胞（動物細胞）的體外培養過程中，培養液中需要添加血清、血漿等一些天然物質．培養箱中充入5% CO₂的主要作是維持培養液（適宜）的pH．為避免培養過程中代謝產物對雜交瘤細胞的毒害，常采取的措施是定期更換培養液．
故答案為：
（1）EcoRI能夠識別的特定的核苷酸序列     花粉管通道    抗蟲的接種
（2）低表達     細胞膜具有流動性      用滅活的病毒處理      需要    維持培養液（適宜）的pH
定期更換培養液（基）

點評 本題考查了基因工程及動物細胞融合在生產實踐中的應用，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟等，掌握各步驟中的相關細節，能結合所學的知識準確解答．