Question

12．科研人員利用轉基因技術將乙烯形成酶（EFE）反義基因導入番茄中獲得耐儲存番茄．
（1）科研人員將EFE反義基因與T-DNA構建重組質粒，將番茄的愈傷組織浸入含有上述重組質粒的農桿菌菌液中，通過該菌的轉化作用使EFE反義基因進入番茄細胞并插入到細胞的DNA上．
（2）將上述愈傷組織細胞進行再分化即可誘導得到試管苗，該過程體現了植物細胞具有全能性．
（3）為檢測耐儲存番茄中EFE反義基因是否轉錄出mRNA，首先要從該番茄中提取mRNA，然后將放射性同位素等記的目的基因（EFE反義基因）作為探針，根據是否形成雜交帶進而判斷EFE反義基因是否轉錄出mRNA．從個體生物水平上鑒定，耐儲存番茄產生的乙烯（激素）比正常的番茄少．

Answer 1

分析 1、農桿菌轉化法（約80%的轉基因植物都是用這種方法獲得的）：
①農桿菌特點：易感染雙子葉植物和裸子植物，對單子葉植物沒有感染力；Ti質粒的T-DNA可轉移至受體細胞，并整合到受體細胞的染色體上．
②轉化：目的基因插人Ti質粒的T-DNA上$\stackrel{進入}{→}$農桿菌→導入植物細胞→目的基因整合到植物細胞染色體上→目的基因的遺傳特性得以穩定維持和表達．
2、目的基因的檢測和鑒定：
（1）分子水平上的檢測  
①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術
②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術
③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術
（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）分析題意可知，該目的基因導入受體細胞采用了農桿菌轉化法，因此需要將EFE反義基因與T-DNA構建重組質粒，再將番茄的愈傷組織浸入含有上述重組質粒的農桿菌菌液中，通過該菌的轉化作用使EFE反義基因進入番茄細胞并插入到細胞的DNA上．
（2）將上述愈傷組織細胞進行再分化即可誘導得到試管苗，該過程體現了植物細胞具有全能性．
（3）為檢測耐儲存番茄中EFE反義基因是否轉錄出mRNA，首先要從該番茄中提取mRNA，然后將放射性同位素等記的目的基因（EFE反義基因）作為探針，根據是否形成雜交帶進而判斷EFE反義基因是否轉錄出mRNA．從個體生物水平上鑒定，耐儲存番茄產生的乙烯（激素）比正常的番茄少．
故答案為：
（1）農桿菌      轉化    DNA
（2）再分化    全能性
（3）目的基因（EFE反義基因）        雜交帶         乙烯

點評 本題考查了基因工程的有關知識，要求考生能夠識掌握因工程的操作步驟，識記農桿菌轉化法的過程，識記植物組織培養的過程和原理，掌握目的基因檢測與鑒定的方法．