Question

下列是基因工程的有關問題，請回答：
（1）限制性核酸內切酶可以識別雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列，并可以使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的

 

（填化學鍵名稱）斷裂，形成的末端總體可分為兩種類型，分別是

 

．
（2）目的基因和運載體重組時需要的工具酶是

 

，和限制性核酸內切酶相比，它對所重組的DNA兩端堿基序列

 

（有或無）專一性要求．
（3）圖1表示構建表達載體時的某種質粒與目的基因．已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓CATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是一↓GATC-．

分析可知，最好選擇限制酶

 

切割質粒，限制酶

 

切割目的基因所在的DNA，這樣做的好處分別是

 

、

 

．
（4）人的膚色正常與白化病受常染色體上基因A和a控制．若白化病基因與相對應的正常基因相比，白化病基因缺失了一個限制酶的切點，甲、乙、丙3人白化基因或相對應正�；�因的核酸分子雜交診斷結果如圖2．
由圖2可以判斷出，乙和丙的基因型分別是

 

、

 

．如果甲與丙婚配，后代患病的概率為

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：1、限制性核酸內切酶（限制酶）
（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的．
（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．
（3）結果：經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端．
2、DNA連接酶
（1）根據酶的來源不同分為兩類：E．coliDNA連接酶、T₄DNA連接酶．
這二者都能連接黏性末端，此外T₄DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時的效率比較低．
（2）DNA連接酶連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．

解答： 解：（1）限制性核酸內切酶（限制酶）能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端．
（2）目的基因和運載體重組時需要DNA連接酶連接兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．它對所重組的DNA兩端堿基序列無專一性．
（3）圖1中顯示，已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓CATCC-，酶Ⅰ切割質粒不會把兩個標記基因都破壞，最好選擇限制酶I切割質粒．限制酶Ⅱ的識別序列和切點是一↓GATC-，目的基因兩端均有酶Ⅱ的識別序列，限制酶II切割目的基因所在的DNA．
（4）由圖2可以判斷出，甲、乙和丙的基因型分別是Aa、AA、aa．如果甲與丙婚配，后代患病的概率為

1

2

故答案為：
（1）磷酸二酯鍵   粘性末端和平末端
 （2）DNA連接酶  無
（3）酶Ⅰ酶Ⅱ酶Ⅰ切割質粒不會把兩個標記基因都破壞     目的基因兩端均有酶Ⅱ的識別序列
（4）AA   aa   1/2

點評：本題著重考查了基因工程原理和技術的有關知識，意在考查考生能識記并理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系，形成一定知識網絡的能力，并且具有一定的分析能力和理解能力．