Question

11．轉基因生物可用于生產人類所需要的藥用蛋白，如激素、抗體、疫苗、酶等．圖甲是通過生物工程培育能產生人胰島素的煙草的過程．請據圖回答下列問題：

（1）基因工程的核心步驟是A（填字母）．此過程所需的工具酶是限制酶和DNA連接酶．
（2）下圖乙是載體和反轉錄得到的胰島素基因的片段，已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-．GeneⅠ和GeneⅡ為質粒上的標記基因，根據圖示分析，應用限制酶Ⅰ切割質粒，用限制酶Ⅱ切割目的基因．構建的重組質粒中，除含有外源基因、標記基因外，還必須含有啟動子和終止子．

（3）B過程中，常用Ca²⁺處理使細菌成為感受態細胞，從而利于重組質粒的導入．
（4）如果從分子水平檢測人胰島素基因是否表達成功，可以采用抗原-抗體雜交方法．

Answer 1

分析 分析圖1：A表示基因表達載體的構建過程；B表示將目的基因導入農桿菌；C表示用選擇培養基篩選含有重組質粒的農桿菌；D表示采用農桿菌轉化法將目的基因導入植物細胞；E表示植物組織培養；F表示檢測過程．
分析圖2：限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-．因此限制酶Ⅱ也能作用于限制酶Ⅰ的識別序列．

解答 解：（1）基因工程的核心步驟是基因表達載體的構建，即A過程，該過程首先需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，還需用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA分子．
（2）用限制酶Ⅱ切割質粒時會將兩個標記基因都破壞，因此只能選用限制酶Ⅰ切割質粒，而切割含有目的基因的外源DNA分子時，只需用限制酶Ⅱ即可．構建的重組質粒中，除含有外源基因、標記基因外，還必須含有啟動子和終止子．
（3）將目的基因導入微生物細胞時，常用感受態細胞法，即常用Ca²⁺處理使細菌成為感受態細胞，從而利于重組質粒的導入．
（4）從分子水平上檢測目的基因是否表達成功，可以采用抗原-抗體雜交方法．
故答案為：
（1）A　限制酶和DNA連接酶
（2）ⅠⅡ啟動子　終止子
（3）Ca²⁺
（4）抗原-抗體雜交

點評 本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及技術，掌握基因工程的具體操作步驟及相關細節，能根據圖中信息準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．