Question

2．科學家利用基因工程技術將魚的抗凍蛋白基因導入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高．在培育轉基因番茄的過程中，下列操作不合理的是（　　）

• A． 可用PCR技術或逆轉錄法獲得抗凍蛋白基因
• B． 將抗凍蛋白基因與相應載體連接構建基因表達載體
• C． 利用農桿菌轉化法將基因表達載體導入番茄體細胞
• D． 在低溫條件下篩選已導入抗凍蛋白基因的番茄細胞

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：A、獲取目的基因的方法包括：從基因文庫中獲取、采用PCR技術體外擴增、人工化學合成（如逆轉錄法），A正確；
B、在培育轉基因番茄的過程中，需要將抗凍蛋白基因與相應載體連接構建基因表達載體，再導入受體細胞，B正確；
C、將目的基因導入植物細胞最常用的方法是農桿菌轉化法，C正確；
D、利用標記基因來自篩選已導入抗凍蛋白基因的番茄細胞，由于該基因在受體番茄細胞中還沒有表達，因此不能在低溫條件下篩選已導入抗凍蛋白基因的番茄細胞，D錯誤．
故選：D．

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節，能結合所學的知識準確判斷各選項，屬于考綱識記和理解層次的考查．