Question

2．草甘膦是一種廣譜除草劑，其除草機制是抑制植物體內EPSPS酶的合成，最終導致植物死亡．但是，它的使用有時也會影響到植物的正常生長．目前，已發現可以從一種抗草甘膦的大腸桿菌突變株中分離出EPSPS基因，若將該基因轉入植物細胞內，從而獲得的轉基因植物就能耐受高濃度的草甘膦．
取6株植物，其中，植物A和D對草甘膦敏感，B和E對草甘膦天然具有抗性，C和F則經過了轉基因處理，但是否成功還未知．圖1為4種限制酶的識別序列和酶切位點，圖2為含有目的基因的DNA片段及其具有的限制酶切點．據圖回答下列問題：

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmpⅠ
酶切位點	C↓CGG GGC↑C	G↓GATCC CCTAG↑G	↓GATC CTAG↑	CCC↓GGG GGG↑CCC

（1）若A-C澆清水，D-F澆的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成長的是ABCE．
（2）若要從大腸桿菌中篩選出含EPSPS基因的突變菌株甲，在大腸桿菌培養基中還必須加入草甘膦．
（3）一個完整的基因表達載體除了具備復制原點、啟動子和終止子外，還應包括標記基因和目的基因．
（4）若需利用酶切法獲得目的基因，最應選擇的限制酶是MspⅠ和SmaⅠ．
（5）通常用農桿菌轉化法將EPSPS基因導入植物體內．假設EPSPS基因已被成功轉移到植物F中，但植物F仍沒有表現出抗性，分析可能的原因目的基因沒有成功表達或表達的產物失活．

Answer 1

分析 分析表格：表中是四種限制酶的識別序列和切割位點，其中BamHⅠ的識別序列也能被MboⅠ識別和切割．
分析圖2：用BamHⅠ切割會破壞目的基因，用MboⅠ切割也會破壞目的基因，因此要用酶切法獲得目的基因，最應選擇的限制酶是MspⅠ和SmaⅠ．

解答 解：（1）植物A和D對草甘膦敏感，B和E對草甘膦天然具有抗性，C和F則經過了轉基因處理，所以A-C澆清水，都能健康成長；F雖經過了轉基因處理，但是否成功還未知，所以D-F澆的水中含有草甘膦，D肯定不能健康成長，E肯定能健康成長，F未知．因此，肯定能健康成長的是ABCE．
（2）要從大腸桿菌中篩選出含EPSPS基因的突變菌株，則必須要用含草甘膦的選擇培養基培養大腸桿菌．
（3）基因表達載體的組成包括復制原點、啟動子、終止子、標記基因和目的基因．
（4）用BamHⅠ切割會破壞目的基因，用MboⅠ切割也會破壞目的基因，因此要用酶切法獲得目的基因，最應選擇的限制酶是MspⅠ和SmaⅠ，這樣既可獲得目的基因，也可以防止目的基因與運載體反向鏈接．
（5）將目的基因導入受體細胞常用農桿菌轉化法．若EPSPS基因已被成功轉移到植物F中，但植物F仍沒有表現出抗性，可能的原因目的基因沒有成功表達或表達的產物失活．
故答案為：
（1）ABCE     
（2）草甘膦   
（3）標記基因  目的基因   
（4）MspⅠSmaⅠ
（5）農桿菌轉化法   目的基因沒有成功表達或表達的產物失活

點評 本題結合圖表，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各步驟中的相關細節問題，能結合圖中和表中信息準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．