Question

19．回答有關基因工程的問題．
普通煙草轉入抗鹽基因培育抗鹽煙草的過程如圖所示．已知含抗鹽基因的DNA和質粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位點，質粒上另有抗四環素基因和抗氨芐青霉素基因．請回答問題：

（1）構建重組質粒時，應選用的限制酶是salⅠ、HindⅢ酶，然后對質粒和含抗鹽基因的DNA進行切割，以保證它們定向連接．
（2）質粒的基本單位是脫氧核苷酸．
（3）切割后的目的基因與質粒由DNA連接酶連接成重組質粒．篩選導入重組質粒的細菌，應在培養基中加入氨芐青霉素，
理由是因為重組質粒帶有抗氨芐青霉素基因，在添加青霉素的培養基中可以存活．
（4）若質粒被某一限制酶識別的序列是一GAATTC一，并在G與A之間切割．請畫出被切割后所形成的黏性末端．
．

Answer 1

分析 分析題圖：含抗鹽基因的DNA和質粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位點，但BamHⅠ酶切位點位于目的基因上，用該酶切割會破壞目的基因，因此選用salⅠ酶和HindⅢ酶對含抗鹽基因的外源DNA和質粒進行切割；質粒含有抗氨芐青霉素基因和抗四環素基因，但重組質粒只含氨芐青霉素抗性基因．

解答 解：（1）分析題圖可知，構建重組質粒時，應選用salⅠ酶和HindⅢ酶對含抗鹽基因的外源DNA和質粒進行切割，這樣會形成不同的黏性末端，可以防止目的基因、質粒的自身連接，以保證目的基因和質粒的定向連接．
（2）質粒的化學本質為小型環狀DNA，因此其基本單位為脫氧核苷酸．
（3）DNA連接酶可將切割后的目的基因與質粒連接成重組質粒．根據圖中信息可知重組質粒帶有抗氨芐青霉素基因，但四環素基因已被限制酶破壞，所以在篩選導入重組質粒的細菌時，應在培養基中加入氨芐青霉素．
（4）在該工程中限制酶能識別的序列和切點是一G^↓GATCC一，則質粒被切割形成的黏性末端為．
故答案為：
（1）salⅠ、HindⅢ酶          含抗鹽基因的DNA
（2）脫氧核苷酸
（3）DNA連接   氨芐青霉素  因為重組質粒帶有抗氨芐青霉素基因，在添加青霉素的培養基中可以存活
（4）

點評 本題結合題圖考查基因工程的相關知識，特別是基因表達載體的構建過程，要求考生明確該步驟需要限制酶和DNA連接酶，至于需要哪種或哪幾種限制酶，需要考生分析題圖，選擇的限制酶要能切割含有目的基因的外源DNA分子和質粒，但不能破壞目的基因．