Question

【題目】利用基因工程技術將細菌中已知序列的高賴氨酸蛋白結構基因（pLRP47）轉入植物細胞獲得高賴氨酸植物新品種，如高賴氨酸萵苣。

（1）從細菌中提取 mRNA，在逆轉錄酶的作用下形成_____，然后在 DNA聚合酶的作用下得到基因 pLRP47，并利用______進行擴增，用_________酶把經限制性核酸內切酶切割的目的基因和農桿菌Ti質粒進行連接，獲得___________。

（2）取搖床中經_____的農桿菌培養液離心并用____________________________________處理以增加細胞壁的通透性。對轉化后的農桿菌進行培養使其恢復到_______________狀態再使其增殖。

（3）用含重組質粒的農桿菌侵染離體的萵苣細胞經____________過程形成的愈傷組織，重組質粒進入萵苣細胞后，利用____________將 pLRP47 基因整合到染色體DNA中，再用含__________________________的培養基繼續培養獲得轉基因萵苣。

（4）由于轉基因生物存在安全性的爭議，為了滿足人類食物的需求，需發展農業。我國廣大農村地區推廣的農作物秸稈的“過腹還田”實現了物質的___________________和多途徑利用；我們還可利用動物的不同習性，設計多種__________________技術。

Answer 1

【答案】單鏈 DNA； PCR 技術 DNA連接酶 重組質粒（重組DNA分子） 擴大培養 氯化鈣 原來的（正常的） 脫分化 T-DNA 營養物質和植物生長調節劑 良性循環 立體養殖

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因—DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA—分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質—抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）以mRNA為模板，在逆轉錄酶的作用下形成單鏈DNA，然后在DNA聚合酶的作用下得到基因pLRP47；體外擴增目的基因可采用PCR技術；將目的基因與運載體連接起來需要用DNA連接酶，從而獲得重組質粒（重組DNA分子）。

（2）取搖床中經擴大培養的農桿菌培養液離心并用氯化鈣處理以增加細胞壁的通透性，使其容易對周圍的DNA分子易于吸收。對轉化后的農桿菌進行培養使其恢復到原來的（正常的）狀態再使其增殖。

（3）愈傷組織是外植體經過脫分化過程形成的；農桿菌轉化法的原理：農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上。因此重組質粒進入萵苣細胞后，利用T-DNA將pLRP47基因整合到染色體DNA中，再用含營養物質和植物生長調節劑的培養基繼續培養獲得轉基因萵苣。

（4）由于轉基因生物存在安全性的爭議，為了滿足人類食物的需求，需發展農業。我國廣大農村地區推廣的農作物秸稈的“過腹還田”實現了物質的良性循環和多途徑利用；我們還可利用動物的不同習性，設計多種立體養殖技術。