Question

13．自然界中的微生物往往是混雜生長的．人們在研究微生物時一般要將它們分離提純，然后進行數量的測定．下面是有關土壤中分解尿素的細菌分離和計數的實驗過程，請回答有關問題．
（1）為分離出土壤中分解尿素的細菌，應該用尿素作為唯一的氮源的培養基進行分離，這種培養基屬于選擇培養基培養基（按功能分類）．也可在培養基中加入酚紅指示劑對該類微生物鑒別．
（2）若取土樣5g，應加入45mL的無菌水配制成稀釋10倍土壤溶液．因土壤中細菌密度很大，需要不斷加以稀釋，配制成10¹～10⁷不同濃度的土壤溶液．將10³～10⁷倍的稀釋液分別吸取0.1mL加入到固體培養基上，用涂布器將菌液鋪平，每個稀釋度下至少涂布3個平板．這種接種方法稱為稀釋涂布平板法．
（3）將接種的培養皿放置在37℃恒溫培養箱中培養24h～48h，觀察并統計菌落數，結果如表，其中10⁵倍的稀釋比較合適，由此計算出每克土壤中的菌落數為4.96×10⁷．這種方法測定的菌落數往往比活菌的實際數目低（低/高）．

稀釋倍數	103	104	105	106	107
平均菌落數（個）	＞500	367	248	26	15

（4）實驗分離得到的能夠分解尿素的細菌需要臨時保藏，需將其接種到試管的固體斜面培養基培養基上，將試管放入4℃℃的冰箱中保藏．

Answer 1

分析 本題是考查土壤中分解尿素的細菌的分離與計數的知識，篩選尿素分解菌需要使用尿素為唯一的氮源的選擇培養基，尿素分解菌可以使用酚紅指示劑進行鑒定．稀釋涂布平板法接種可以用來進行微生物的計數．根據問題涉及的具體內容梳理相關知識點，然后分析解答．

解答 解：（1）分離出土壤中分解尿素的細菌，應該用尿素作為唯一氮源的選擇培養基，尿素分解菌可以用酚紅指示劑進行鑒定．
（2）若取土樣5g，應加入45ml的無菌水配制成稀釋10倍土壤溶液，樣品的稀釋程度直接影響平板上生長的菌落的數目，選用一定稀釋范圍的樣品進行培養，取樣稀釋前，一定要將菌液搖勻以減少誤差；將10³-10⁷倍的稀釋液分別吸取0.1mL加入到固體培養基上，用稀釋涂布平板法將菌液用涂布器涂布到固體培養基上．
（3）將接種的培養皿放置在37℃恒溫培養箱中培養24h～48h，觀察并統計具有紅色環帶的菌落既是分解尿素的菌的菌落，估算樣品中的活菌數時，往往選取菌落數在30 到300之間的平板，分析表格是數據可知，10⁵的稀釋度平板菌落數在這一范圍．每克土壤中的菌落數為248×10×10⁵÷5=4.96×10⁷．稀釋涂布平板法進行微生物計數時，測定的菌落數往往比活菌的實際數目低．
（4）菌種的臨時保藏需要用將其接種到試管的固體斜面培養基培養基上，將試管放入4℃的冰箱中保藏．
故答案為：
（1）尿素作為唯一的氮源   選擇培養基   酚紅
（2）45   稀釋涂布平板法
（3）10⁵ 4.96×10⁷低
（4）固體斜面培養基   4℃

點評 本題是知識點是分解尿素的菌的代謝類型，分解尿素的菌的分離應該選用的培養基，稀釋涂布平板法的操作過程，統計菌落數的平板要求，主要考查學生對分解尿素的菌的分離和計數的知識的掌握和運用．