Question

2．柴油是重要的燃料油之一，也因泄漏與不當排放等造成了嚴重的環境污染．科研人員從遭受柴油污染的土壤樣品中取土樣5g，加入含100mL培養基M的錐形瓶中，在30℃條件下振蕩培養5d，取出5mL培養液接種到相同的新鮮培養基，按此步驟，連續培養5次，分離獲得醋酸鈣不動桿菌DB（一種柴油降解菌）．利用該菌，科研人員進一步探索其降解柴油的最佳條件，獲得實驗結果如圖．請回答下列問題．

（1）為獲得醋酸鈣不動桿菌DB，培養基M應以柴油為唯一碳源，還要考慮無機鹽的種類和比例．
（2）在實驗過程中，科研人員“30℃條件下振蕩培養5d，取出5mL培養液接種到相同的新鮮培養基，按此步驟，連續培養5次的主要目的是使醋酸鈣不動桿菌DB的數量增加（或“使柴油分解菌富集”）．
（3）在分離醋酸鈣不動桿菌DB操作時，在嚴格無菌條件下，采用平板劃線法（填接種方法）在制備好的牛肉膏蛋白胨培養基上進行接種，接種完，對接種環進行灼燒滅菌處理．培養一階段后，觀察、挑取平板上形態、顏色、大小和隆起程度等一致的菌落進行重復培養，直到分離出單一菌株．
（4）據圖分析，若某地區土壤發生柴油重度污染時，則可以（對被柴油重度污染的土壤進行稀釋）使柴油濃度降低至4000mg•kg^-1左右，并添加濃度為6mg•g^-1的表面活性劑，以有利于提高對柴油的降解效果．

Answer 1

分析 分析圖1：隨著柴油添加量的增加，柴油的降解率呈先增加后下降的趨勢，即在4000mg．kg^-1左右柴油的降解率最高．
分析圖2：隨著表面活性劑的濃度的上升，柴油的降解率呈不斷增加的趨勢，圖中表面活性劑的濃度為6mg．g^-1左右時降解率最高．

解答 解：（1）分析題意可知，醋酸鈣不動桿菌DB是一種柴油降解菌，因此為獲得醋酸鈣不動桿菌DB，培養基M應以柴油為唯一碳源，還要考慮無機鹽的種類和比例．
（2）在實驗過程中，科研人員“30℃條件下震蕩培養5天，取出5mL培養液接種到相同的新鮮培養基，按此步驟，連續培養5次”的主要目的是使醋酸鈣不動桿菌DB的數量增加（或使柴油分解菌富集）．
（3）在分離醋酸鈣不動桿菌DB操作時，在嚴格無菌條件下，采用平板劃線法或稀釋涂布平板法在制備好的牛肉膏蛋白胨培養基上進行接種，接種完，對接種環進行灼燒滅菌處理．培養一段時間后，觀察、挑取平板上形態、顏色、大小和隆起度等一致的菌落進行重復培養，直到分離出單一菌株．
（4）根據柱形圖結果可知，在柴油添加量為4000mg．kg^-1左右柴油的降解率最高，表面活性劑的濃度為6mg．g^-1時降解率最高，因此若某地區土壤發生柴油重度污染時，則可以將對被柴油重度污染的土壤進行稀釋，使柴油濃度降低至4000mg．kg^-1左右，并添加濃度為6mg．g^-1的表面活性劑，以有利于提高對柴油的降解效果．
故答案為：
（1）柴油     種類
（2）使醋酸鈣不動桿菌DB的數量增加（或“使柴油分解菌富集”）
（3）平板劃線法   灼燒     菌落
（4）（對被柴油重度污染的土壤進行稀釋）使柴油濃度降低至4 000 mg•kg^-1左右         6 mg•g^-1

點評 本題考查了微生物分離和純化的有關知識，要求考生掌握選擇培養基在分離微生物的實驗過程中的運用，識記純化微生物的接種方法，能夠根據柱形圖中的信息提出有效的降解柴油污染的措施．