Question

5．研究發(fā)現(xiàn)僅在大豆葉肉細(xì)胞中存在一種多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白（PGP），它能夠特異性地抑制部分致病真菌細(xì)胞內(nèi)的多聚半乳糖醛酸酶的活性，從而減弱病原菌對(duì)植株的侵害．研究人員成功地將PGP基因?qū)�入小麥體內(nèi)，以期獲得抗根腐病能力更高的小麥新品種．請(qǐng)分析回答問題：
（1）反轉(zhuǎn)錄法是基因工程中獲得目的基因的常用方法，本研究中獲取模板RNA的大豆細(xì)胞最好取自大豆葉肉，在提取RNA過程中要特別注意防止RNA的水解，試提出一種保護(hù)措施：在低溫條件下快速提�。ɑ蚣尤脒m量的RNA酶抑制劑）．
（2）目的基因的擴(kuò)增常采用PCR技術(shù)，而PCR引物的設(shè)計(jì)是獲得大量高純度目的基因的關(guān)鍵．引物中堿基數(shù)量越多，則引物的特異性越高．
（3）如圖是本研究使用的質(zhì)粒載體pAHC25的酶切圖譜．用限制酶Sac I和BamH I同時(shí)處理pAHC25，結(jié)果會(huì)產(chǎn)生3種不同的片段．在構(gòu)建含PGP基因的表達(dá)載體時(shí)，分析質(zhì)粒酶切圖譜，研究人員選擇了有單一酶切點(diǎn)的限制酶Sma I和Sac I作為本研究的工具酶，其優(yōu)點(diǎn)是可以保證目的基因插入部位和方向的準(zhǔn)確．
（4）研究人員用基因槍法轉(zhuǎn)化該小麥的幼胚細(xì)胞，選擇幼胚細(xì)胞的原因是分裂旺盛，全能性高，容易誘導(dǎo)形成植株．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是質(zhì)粒載體pAHC25的酶切圖譜，該質(zhì)粒含有多個(gè)酶切位點(diǎn)（有1個(gè)限制酶SacⅠ的切割位點(diǎn)、2個(gè)限制酶BamHⅠ的切割位點(diǎn)、有1個(gè)限制酶SmaⅠ的切割位點(diǎn)、有4個(gè)限制酶SalⅠ的切割位點(diǎn)、有2個(gè)BglⅡ的切割位點(diǎn)等）；含有2個(gè)標(biāo)記基因（1和2）；含有啟動(dòng)子．

解答 解：（1）多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白（PGP）僅存在于大豆葉肉細(xì)胞中，因此獲取模板RNA的大豆細(xì)胞最好取自大豆葉肉細(xì)胞；RNA的水解需要RNA酶起作用，所以能抑制RNA酶活性的方法均可．
（2）采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)一對(duì)引物，引物中堿基數(shù)目越多，且特異性越強(qiáng)．
（3）在環(huán)狀質(zhì)粒pAHC25上有1個(gè)Sac I酶切位點(diǎn)和2個(gè)BamH I酶切位點(diǎn)，所以用這兩種酶同時(shí)處理pAHC25，將會(huì)使環(huán)狀質(zhì)粒出現(xiàn)3個(gè)切口，產(chǎn)生3種不同的片段；因?yàn)橄拗泼窼ma I和Sac I都只有單一酶切點(diǎn)，所以對(duì)質(zhì)粒切割后可以保證目的基因插入部位和方向的準(zhǔn)確，不會(huì)影響基因表達(dá)載體的表達(dá)．
（4）用基因槍法轉(zhuǎn)化時(shí)，選擇幼胚細(xì)胞的原因是幼胚細(xì)胞分裂旺盛，全能性高，容易誘導(dǎo)形成植株．
故答案為：
（1）大豆葉肉       在低溫條件下快速提�。ɑ蚣尤脒m量的RNA酶抑制劑）
（2）高     
（3）3       可以保證目的基因插入部位和方向的準(zhǔn)確
（4）分裂旺盛，全能性高

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的技術(shù)及原理、酶的特性及影響因素，要求考生識(shí)記基因工程的工具和操作步驟，能根據(jù)題中信息“僅在大豆葉肉細(xì)胞中存在一種多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白（PGP）”和圖中信息答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．