Question

8．內皮素（ET）是一種多肽，它有強烈的血管收縮和促進平滑肌細胞增殖等作用．研究發現內皮素功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯系．內皮素主要通過與 靶細胞膜上的內皮素受體結合而發揮生物學效應．ET_A是內皮素的車要受體，科研人員試圖通過構建表達載體，實現ET_A基因在細胞中高效表達．其過程如下（圖中SNAP基因 是-種熒光蛋白基因，限制酶Apal的識別序列為C↓CCGGG，限制酶Xhol的識別序列為C↓TCGAG）．請分析回答

（1）完成過程①、②需要的酶分別是逆轉錄酶、DNA聚合酶；與過程②相比，過程①、②特有的堿基配對方式是U-A．
（2）過程③中，限制酶Xho I切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開，形成目的基因的黏性末端是．
（3）過程④中用Xhol和Apal兩種限制酶切割，獲得的黏性末端是不同（填“相同”或“不同”）的，其主要目的是防止目的基因和載體發生自身環化，使目的基因定向連接到載體上．圖中構建的基因表達載體中，除標識的組分外，還應具有終止子．
（4）過程⑥中，要用Ca²⁺預先處理大腸桿菌，目的是使其處于容易吸收外界DNA的感受態．
（5）利用SNAP基因與ET_A基因結合構成融合基因，目的是檢測ETA基因能否表達及表達量．

Answer 1

分析 分析圖形：123表示反轉錄法獲得目的基因的過程，4表示構建基因表達載體，5表示限制酶切割質粒，6表示重組質粒導入受體細胞，7表示目的基因的檢測，以此分析答題．

解答 解：（1）圖中1過程是逆轉錄過程，需要逆轉錄酶的催化，過程2表示以單鏈DNA為模板合成雙鏈DNA，因此需要DNA聚合酶；與過程2相比，該過程特有的堿基配對方式是U-A．
（2）過程3利用限制酶XhoⅠ切割DNA獲得目的基因的過程，限制酶使得DNA的磷酸二酯鍵斷開，形成的黏性末端是-AGCT（或）．
（3）圖中顯示利用了兩種限制酶切割目的基因和載體，從而獲得了不同的黏性末端，可以防止目的基因和載體發生自身環化，使目的基因定向連接到載體上．圖中構建的基因表達載體中，除啟動子、標記基因和目的基因外，還應具有終止子．
（4）過程6重組質粒導入受體細胞的過程，要用Ca²⁺（或CaCl₂）預先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界DNA的感受態．
（5）利用SNAP基因與ET_A基因結合構成融合基因，可以檢測ET_A基因能否表達及表達量．
故答案為：
（1）逆轉錄酶、DNA聚合酶　　　U-A
（2）磷酸二酯  
（3）不同　　防止目的基因和載體發生自身環化，使目的基因定向連接到載體上    終止子
（4）處于容易吸收外界DNA 的感受態
（5）檢測ETA 基因能否表達及表達量

點評 本題結合轉基因香蕉形成的流程圖，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，能結合圖中信息準確答題．