Question

9．小鼠的某種抗體由輕鏈和重鏈組成，科學(xué)家將編碼輕鏈和重鏈的基因分別導(dǎo)入兩個(gè)不同的煙草植物體內(nèi)，然后讓兩株植物進(jìn)行雜交就能獲得可同時(shí)編碼輕鏈和重鏈兩種多肽的植株，即合成小鼠抗體的轉(zhuǎn)基因植物．回答下列問題：
（1）若要獲取小鼠的編碼輕鏈和重鏈的基因，可以先提取小鼠漿細(xì)胞中編碼兩條鏈的mRNA，然后通過逆轉(zhuǎn)錄 過程獲取小鼠的cDNA，并利用PCR技術(shù)對目的基因進(jìn)行擴(kuò)增．
（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶，基因表達(dá)載體中的目的基因兩端的序列分別是啟動(dòng)子和終止子．
（3）用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的過程中，常常將目的基因插入到農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA
上．檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞可用DNA分子雜交技術(shù)，一般用標(biāo)記的目的基因作探針．
（4）若想大規(guī)模培育能合成小鼠抗體的轉(zhuǎn)基因植物，可采用植物培養(yǎng)技術(shù)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）以RNA為模板合成DNA的過程為逆轉(zhuǎn)錄；PCR技術(shù)可在體外擴(kuò)增目的基因．
（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，首先需要限制酶切割運(yùn)載體和含有目的基因的外源DNA分子，其次還需要用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組DNA分子．基因表達(dá)載體中的目的基因兩端的序列分別是啟動(dòng)子和終止子．
（3）農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上．根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上．檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞可用DNA分子雜交技術(shù)，一般用標(biāo)記的目的基因作探針．
（4）植物培養(yǎng)技術(shù)可以快速繁殖優(yōu)良植物品種．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄      PCR
（2）限制酶和DNA連接酶       啟動(dòng)子     終止子
（3）T-DNA      目的基因
（4）植物培養(yǎng)

點(diǎn)評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．