Question

14．基因工程獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過(guò)程如圖1所示，圖中SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ表示三種限制酶切割位點(diǎn)，質(zhì)粒含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因．

據(jù)圖回答下列問(wèn)題：
（1）要得到圖1中的重組質(zhì)粒，先用的限制酶是SalⅠ酶，再用DNA連接酶處理．
（2）感染煙草細(xì)胞前，為確保農(nóng)桿菌中含有目的基因，提高轉(zhuǎn)化成功率，需進(jìn)行初步篩選，過(guò)程如圖2．制備培養(yǎng)基A時(shí)，應(yīng)添加的抗生素是氨芐青霉素．篩選獲得的6個(gè)菌落中，可能有些并不含有目的基因，原因是這些農(nóng)桿菌含有的外源DNA是自身環(huán)化的質(zhì)粒（質(zhì)粒）、兩兩連接的質(zhì)粒（至少寫2種）．
（3）為判斷菌落是否含有目的基因，可采用影印法，使用絨氈布?jí)涸谂囵B(yǎng)基A菌落上，帶出少許菌種，然后平移并印壓在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基B上．培養(yǎng)一段時(shí)間后，比較培養(yǎng)基A、B菌落生長(zhǎng)情況，則可判斷不含有目的基因的是1、2、3、5（填數(shù)字）菌落．
（4）煙草細(xì)胞形成愈傷組織的過(guò)程稱為脫分化（或去分化），為誘導(dǎo)愈傷組織的形成，需要在培養(yǎng)基中添加一定濃度的植物激素（或生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素）．

Answer 1

分析 分析圖1：圖示為轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過(guò)程，首先構(gòu)建基因表達(dá)載體；其次采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（煙草細(xì)胞）；再采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將含有目的基因的煙草細(xì)胞培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草．
分析圖2：圖2是篩選含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌的過(guò)程，培養(yǎng)基A和B中應(yīng)該分別加入氨芐青霉素、四環(huán)素．

解答 解：（1）因?yàn)橘|(zhì)粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因都含有BamHⅠ的切割位點(diǎn)，用該種限制酶會(huì)使目的基因失活；目的基因上只有HindⅢ限制酶的一個(gè)切割位點(diǎn)，因此不符合條件，因此只能先用的限制酶是SalⅠ酶，再用DNA連接酶處理．
（2）用SalI和HindIII兩種限制酶對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割時(shí)，會(huì)破會(huì)四環(huán)素抗性基因，但不會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生存，但不能在含有四環(huán)素培養(yǎng)基上生存，因此制備培養(yǎng)基A時(shí)，應(yīng)添加氨芐青霉素．篩選獲得的6個(gè)菌落中，可能有些并不含有目的基因，原因是這些農(nóng)桿菌含有的外源DNA是自身環(huán)化的質(zhì)粒（質(zhì)粒）、兩兩連接的質(zhì)粒．
（3）采用影印法將培養(yǎng)基A菌落平移并印壓在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基B上．圖中1、2、3、5共四個(gè)菌落能生長(zhǎng)，說(shuō)明四個(gè)菌落含有四環(huán)素抗性基因，表明四環(huán)素抗性基因沒有被破壞，因此不含有目的基因．
（4）將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株需要用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，愈傷組織經(jīng)再分化進(jìn)而形成完整植株，此過(guò)程除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素．
故答案為：
（1）SalⅠDNA連接
（2）氨芐青霉素     自身環(huán)化的質(zhì)粒（質(zhì)粒）、兩兩連接的質(zhì)粒
（3）1、2、3、5  
（4）脫分化（或去分化）        植物激素（或生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素）

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過(guò)程圖，考查基因工程、植物組織培養(yǎng)等知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、工具及操作步驟，能根據(jù)圖中限制酶的位置及題干要求選擇正確的限制酶；能根據(jù)題中信息判斷培養(yǎng)基中抗生素的名稱；識(shí)記植物組織培養(yǎng)過(guò)程及條件．