Question

1．某研究小組欲將已知抗除草劑基因導人原生質體培育抗除草劑大豆．請回答下列問題：
（1）為獲得大量抗除草劑基因，可通過PCR技術進行擴增，也可將其連接到質粒上，通過大腸桿菌培養擴增．
（2）制備葉片原生質體的酶混合液中，一般含較高濃度的甘露醇，其目的是避免制備的原生質體吸水脹破．無菌原生質體的制備過程中，整個無菌操作過程需在超凈臺中進行．
（3）可通過顯微注射方法，直接將抗除草劑基因導入原生質體的細胞核．此外，還可用聚乙二醇融合、電擊等方法導入．導入后的原生質體需再生出細胞壁，經持續分裂獲得愈傷組織，進一步分化獲得再生植株并擴大繁殖．
（4）利用帶有標記的抗除草劑基因特殊片段與從轉基因植株提取的RNA進行分子雜交，驗證抗除草劑基因是否被整合到受體的細胞中并轉錄．

Answer 1

分析 1、植物組織培養過程：離體的植物器官、組織或細胞脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再分化形成胚狀體，進而形成完整的植株．
2、植物組織培養需要的條件：①消毒滅菌；②一定濃度的植物激素；③適宜的溫度；④充足的養料

解答 解：（1）可通過PCR技術進行體外擴增，獲得大量抗除草劑基因．之后抗除草劑基因和運載體質粒重組，構建基因表達載體．
（2）用酶混合液處理植物細胞時，酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇，其作用是細胞內外的滲透壓，防止細胞吸水脹破．植物組織培養過程中需要無菌無毒的環境，因此酶混合液需通過過濾（G6玻璃砂漏斗）滅菌，才能用于無菌原生質體的制備，整個無菌操作過程需在超凈臺中進行．
（3）可通過顯微注射方法，直接將抗除草劑基因導入原生質體的細胞核．導入后的原生質體需再生出細胞壁，形成重組細胞，經持續分裂獲得愈傷組織，進一步分化獲得再生植株并擴大繁殖．
（4）要檢驗抗除草劑基因是否被整合到受體的細胞中并轉錄，可以用RNA與DNA分子雜交技術驗證
故答案為：
（1）PCR      質粒
（2）吸水脹破          超凈臺
（3）顯微注射      聚乙二醇    細胞壁
（4）分子雜交

點評 本題考查植物組織培養、基因工程技術，要求考生識記植物組織培養的過程、條件及相關應用；識記基因工程的原理和具體步驟的相關內容，能結合所學的知識準確答題．