Question

16．某研究所利用基因工程、胚胎工程等技術獲得能產生人凝血因子的轉基因山羊．回答下列問題：
（1）基因工程的基本操作流程中，當獲取目的基因后，在將其中導入受體細胞前需要進行一個重要的操作步驟，即構建（基因）表達載體，該步驟使用的兩種工具酶分別是限制酶、DNA連接酶．
（2）從公羊體內采集的精子需經過獲能處理，才能在體外與卵細胞結合形成受精卵．常用顯微注射法將目的基因導入受精卵中，受精卵在體外培養至桑椹胚（或囊胚）階段時再移植到母羊子宮中．
（3）利用分子雜交技術可檢測轉基因山羊細胞中的人凝血因子是否轉錄出了mRNA（填“tRNA”、“mRNA”或“rRNA”）；利用針對人凝血因子的抗體進行抗原-抗體雜交，可檢測目的基因是否翻譯．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲取；②基因表達載體的構建；③將目的基因導入受體細胞；④目的基因的檢測與表達．構建基因表達載體的步驟中，首先需要限制酶切割外源DNA分子和運載體，其次還需要DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組DNA分子．
（2）精子需要經過獲能處理才能參與受精；將目的基因導入動物細胞常用顯微注射法；胚胎移植時，應該選擇發育到桑椹胚或囊胚階段的胚胎．
（3）利用分子雜交技術可檢測轉基因山羊細胞中的人凝血因子是否轉錄出了mRNA；檢測目的基因是否翻譯，可利用針對人凝血因子的抗體進行抗原-抗體雜交．
故答案為：
（1）（基因）表達載體   限制酶、DNA連接酶
（2）獲能       顯微注射       桑椹胚（或囊胚）
（3）mRNA       人凝血因子

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節問題，能結合所學的知識準確答題．