Question

10．限制性內切酶Ⅰ的識別序列和切點是-G^↓GATCC-，限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點是-^↓GATC-．在質粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側各有1個酶Ⅱ的切點．
（1）請畫出質粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端．
（2）請畫出目的基因兩側被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端．
（3）在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來？為什么？
能．因為：因為它們有相同的粘性末端．

Answer 1

分析 關于限制酶，考生可以從以下幾方面把握：
（1）來源：主要從原核生物中分離純化出來．
（2）特異性：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（3）結果：形成黏性末端或平末端．

解答 解：（1）限制性內切酶Ⅰ的識別序列和切點是-G^↓GATCC-，因此質粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端為：．
（2）限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點是-^↓GATC-，因此目的基因兩側被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端為：．
（3）限制性內切酶Ⅰ和限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點不同，但兩種切割形成的黏性末端相同，因此可在DNA連接酶的作用下連接起來．
故答案為：
（1）
（2）
（3）能    因為它們有相同的粘性末端

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握基因工程各操作步驟中需要注意的細節問題；識記限制酶的作用特點，能結合限制性內切酶Ⅰ和限制性內切酶Ⅱ的識別序列及切割位點準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．