Question

8．微生物的抗性突變是自發產生的還是與相應的環境因素有關．有人設計下列實驗，以研究探討該問題．實驗選用對鏈霉素敏感的大腸桿菌K12．培養基3、7、11中含有鏈霉素，其它培養基中不含鏈霉素．請據實驗回答：
（1）將原始對鏈霉素敏感大腸桿菌K12菌種涂布在培養皿1的表面培養，接著通過如圖“印章”將培養皿1中的菌群“印”在培養皿2、3上培養．“印章”位置保持不變．培養皿3根據其功能，稱為選擇培養基．“印章”使用前需作滅菌處理．
（2）培養基3的A點處有菌落生長，將培養基2中相應的A點位置的菌落上挑出少量移入培養基4中．如圖反復幾次實驗．請根據實驗現象解釋“微生物的突變是自發的還是環境因素導致的”：自發突變的，原因是因為抗鏈霉素菌種的獲得是從沒有接觸過鏈霉素的敏感細菌中獲得的．
（3）要分離出單個菌落，除了本實驗中的涂布法外，還可以用平板劃線法．
（4）上述不含鏈霉素培養基通常使用的是牛肉膏蛋白胨培養基．
（5）現有5種營養缺陷型菌株1、2、3、4、5，它們不能合成生長所必需的物質G，已知A、B、C、D、E都是合成G物質的必需中間產物，但不知這些物質合成的順序，于是在培養基中分別加入這幾種物質并分析了這幾種物質對各種營養缺陷型菌株生長的影響，結果如表所示．根據以下結果，推測這幾種物質的合成順序應是E→A→C→B→D→G．

物質	培養基中加入的物質
突變體	A	B	C	D	E	G
1	-	-	-	+	-	+
2	-	+	-	+	-	+
3	-	-	-	-	-	+
4	-	+	+	+	-	+
5	+	+	+	+	-	+

（+：表示生長-：表示不生長）

Answer 1

分析 1、影印法接種的具體過程是：將待測的濃縮菌懸液涂在合適的平板上，等其長好后作為母平板（每平板上的菌落控制在50～300個）；用一小塊滅菌的絲絨固定在直徑較平板略小的圓柱形木塊上，構成印章（即接種工具）；然后把長有菌落的母平板倒置在絲絨的印章上，輕輕印一下；再把此印章在另一含有選擇培養基的平板上輕輕印一下，經培養后，選擇培養基平板上長出的菌落與母平板上的菌落位置對應，比較影印平板與母平板上菌落生長情況，即可從相應位置的母平板上選出待測的突變型菌落．影印法最初是為證明微生物的抗藥性突變是自發的、與相應的環境因素無關而設計的實驗，目前已廣泛應用于營養缺陷型的篩選以及抗藥性菌株篩選等研究工作中．
2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落．

解答 解：（1）培養基3加入了鏈霉素，只有抗鏈霉素大腸桿菌K12才能在上面生長，所以是選擇培養基；印章在使用前必須進行滅菌處理，以消除印章上的雜菌對實驗結果的影響．
（2）通過題圖及問題描述分析可知，抗鏈霉素菌種的獲得是從沒有接觸過鏈霉素的敏感細菌中獲得的，所以抗鏈霉素菌種的突變是自發突變，不是環境因素引起．
（3）由題圖看出，接種時用的是稀釋涂布平板法，除此以外分離菌種常用的方法還有平板劃線法．
（4）題圖中不含鏈霉素的培養基通常使用的是牛肉膏蛋白胨培養基．
（5）由表格可知，加入G，5種突變體都能在上面生長，加入D，4種突變體能在上面生長，加入B，3種突變體能在上面生長，加入C，2種突變體能在上面生長，加入A，1種突變體能在上面生長，加入E，5種突變體都不能在上面生長．所以這幾種物質的合成順序應是E→A→C→B→D→G．
故答案為：
（1）選擇    滅菌
（2）自發突變的      因為抗鏈霉素菌種的獲得是從沒有接觸過鏈霉素的敏感細菌中獲得的
（3）平板劃線
（4）牛肉膏蛋白胨培養基
（5）E→A→C→B→D→G

點評 本題主要考查微生物的影印法培養，意在考查選擇培養的過程，提高學生的實驗過程分析能力和相關實驗技能．