Question

1．科學家利用土壤農桿菌把編碼霍亂毒素的無毒性β鏈的基因轉移到苜蓿細胞，再將其培養成幼苗，食用這種苜蓿苗后，霍亂毒素β鏈很快被喉、腸胃等部位的分泌性粘液細胞吸收，刺激特異性抗體的大量產生，使機體獲得對霍亂的免疫．其具體過程如下：

（1）構建重組DNA分子常用的工具酶是限制酶和DNA連接酶，基因工程中構建基因表達載體的目的是使目的基因在宿主細胞中穩定地復制并表達．
（2）圖中過程②采用的方法是農桿菌轉化法，Ti質粒上有一個tms片段能促進生長素的大量合成，在對Ti質粒改造時要將該片段去除，其原因是防止植物（苜蓿）體內生長素濃度過高而抑制植物（苜蓿）生長．
（3）該實驗中將農桿菌轉入苜蓿細胞的原生質體后，需再生細胞壁，實驗室檢測原生質體是否再生出細胞壁的方法是將細胞置于高滲溶液中，觀察是否發生質壁分離．
（4）含目的基因的苜蓿細胞通過植物組織培養技術培養，經過脫分化、再分化兩個重要階段能發育成幼苗．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）構建重組DNA分子常用的工具酶是限制酶和DNA連接酶，基因表達載體的構建是基因工程的核心步驟，目的是使目的基因在宿主細胞中穩定地復制并表達．
（2）圖中過程②為目的基因導入的方法，采用的方法是農桿菌轉化法，Ti質粒上有一個tms片段能促進生長素的大量合成，在對Ti質粒改造時要將該片段去除，其原因是  防止植物（苜蓿）體內生長素濃度過高而抑制植物（苜蓿）也長．
（3）原生質體長出細胞壁才會發生質壁分離，故實驗室檢測原生質體是否再生出細胞壁的方法是將細胞置于高滲溶液中，觀察是否發生質壁分離．
（4）含目的基因的苜蓿細胞通過植物組織培養技術培養，經過分化、再分化兩個重要階段能發育成幼苗．

故答案為：
（1）限制酶和DNA連接酶   使目的基因在宿主細胞中穩定地復制并表達
（2）農桿菌轉化法  防止植物（苜蓿）體內生長素濃度過高而抑制植物（苜蓿）生長
（3）將細胞置于高滲溶液中，觀察是否發生質壁分離
（4）脫分化   再分化

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節問題，能結合所學的知識準確判斷各選項．