Question

5．人的內皮抑素（一種蛋白質）能誘導血管內皮細胞凋亡，進而抑制新血管的產生．臨床上通過靜脈注射含有內皮抑素基因的腺病毒感染腫瘤細胞，使腫瘤細胞產生并釋放內皮抑素，抑制新生血管的形成，使腫瘤細胞進入休眠狀態并誘導其凋亡．
回答下列問題：
（1）從肝細胞中提取總mRNA，利用逆轉錄酶合成cDNA（或DNA），根據內皮抑素基因的核苷酸序列（或序列、堿基序列、堿基對序列或脫氧核苷酸序列）設計并合成引物，利用PCR技術得到大量內皮抑素基因．
（2）在構建含內皮抑素基因的腺病毒并導人受體細胞的過程中，以限制酶（或限制性核酸內切酶）和DNA連接酶作為工具酶，以腺病毒作為載體．
（3）在進入臨床使用前，需用體外培養的血管內皮細胞進行生理、病理檢測．為獲得大量的血管內皮細胞，首先用胰蛋白（或膠原蛋白）酶處理血管內皮組織，使其分散成單個細胞，制成細胞懸液，然后將其放人含血清、血漿等一些天然成分的合成培養基中培養．
（4）血管內皮細胞被重組腺病毒感染后，若通過抗原一抗體雜交方法檢測呈陽性并觀察到細胞凋亡，則說明內皮抑素基因得到表達且具有生物學活性．
（5）臨床上將含內皮抑素基因的腺病毒通過靜脈注射感染腫瘤細胞，使腫瘤生長受到抑制，這種治療方法屬于體內（填“體內”或“體外”）基因治療．

Answer 1

分析 1、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、基因治療的種類：體外基因治療和體內基因治療（注意兩者的區別），其中效果比較可靠的是體外基因治療．
體外基因治療：先從病人體內獲得某種細胞進行培養，然后再體外完成轉移，再篩選成功轉移的細胞增植培養，最后重新輸入患者體內，如腺苷酸脫氨酶基因的轉移．
體內基因治療：用基因工程的方法直接向人體組織細胞中轉移基因的方法．

解答 解：（1）以mRNA為模板合成DNA的過程稱為逆轉錄過程；根據內皮抑素基因的核苷酸序列（或序列、堿基序列、堿基對序列或脫氧核苷酸序列）設計并合成引物，利用PCR技術得到大量內皮抑素基因．
（2）構建基因表達載體時，首先需要限制酶切割外源DNA分子和運載體，其次需要DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA分子．根據題干信息“臨床上通過靜脈注射含有內皮抑素基因的腺病毒感染腫瘤細胞”可知，構建基因表達載體時以腺病毒作為載體．
（3）動物細胞培養時，首先用胰蛋白（或膠原蛋白）酶處理血管內皮組織，使其分散成單個細胞，制成細胞懸液，然后將其放人含 血清、血漿等一些天然成分的合成培養基中培養．
（4）檢測目的基因是否表達產生相應的蛋白質，可采用抗原-抗體雜交技術．
（5）臨床上將含內皮抑素基因的腺病毒通過靜脈注射感染腫瘤細胞，使腫瘤生長受到抑制，這種治療方法屬于體內基因治療．
故答案為：
（1）cDNA（或DNA）　　核苷酸序列（或序列、堿基序列、堿基對序列或脫氧核苷酸序列）
（2）限制酶（或限制性核酸內切酶）和DNA連接酶 　　腺病毒
（3）胰蛋白（或膠原蛋白）　　血清、血漿
（4）抗原一抗體雜交
（5）體內

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟及各操作步驟中需要注意的細節；了解基因工程技術的相關應用，能結合題中信息準確答題．