Question

2．在某些深海魚中發現的抗凍蛋白基因afp對提高農作物的抗寒能力有較好的應用價值．如圖所示是獲得轉基因萵苣的技術流程，請據圖回答下列問題：
（1）獲取目的基因的主要途徑包括從自然界已有的物種中分離和（用逆轉錄等方法進行）人工合成．
（2）①過程需要的酶有限制酶、DNA連接酶．
（3）重組質粒除了帶有抗凍蛋白基因afp以外，還必須含有啟動子、終止子和標記基因，這樣才能構成一個完整的基因表達載體．
（4）如果受體細胞C₁是土壤農桿菌，則將目的基因導入它的Ti質粒上的T-DNA，使目的基因進入受體細胞C₂，并將其插入到受體細胞C₂中染色體DNA上，使目的基因的遺傳特性得以穩定維持和表達，形成轉基因萵苣．經②過程獲得的轉基因萵苣中的目的基因是否表達，在分子水平上可用抗原-抗體雜交法進行檢測，如果出現雜交帶，說明目的基因已經表達蛋白質產品，轉基因萵苣培育成功．
（5）基因工程的應用除了以上之外還有很多，如用轉基因動物作器官移植的供體，其主要優點是避免免疫排斥反應．

Answer 1

分析 （1）獲取目的基因的主要途徑有從自然界已有的物種中分離和人工合成．①DNA在NaCl溶液中的溶解度隨NaCl濃度的不同而不同．當NaCl的濃度為0.14mol/L時，DNA的溶解度最低．利用這一原理，可使溶解在NaCl溶液中的DNA析出．②DNA不溶于酒精溶液，但是細胞中的其他許多物質溶于酒精溶液．利用這一原理，可以進一步提取含雜質較少的DNA．③DNA遇二苯胺（沸水浴）會染成藍色；DNA還有遇甲基綠溶液被染成藍綠色的特性．上述兩種方法均可用于鑒定DNA的存在．
（2）①過程為基因表達載體的構建過程，需要用到限制酶，切開特定的磷酸二酯鍵，形成粘性末端，DNA連接酶，連接磷酸二酯鍵．
（3）一個完整的基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因．
（4）農桿菌轉化法利用的是農桿菌的轉化作用，將目的基因整合到受體細胞的染色體DNA上，進而使目的基因能夠穩定遺傳和表達．檢測目的基因是否成功表達可采用抗原--抗體雜交法．

解答 解：（1）目的基因的獲取可采取直接分離獲得也可采用人工合成方法，人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法．              
（2）提取目的基因需限制酶，將目的基因與運載體結合需DNA連接酶，故①過程需要的酶有限制酶和DNA連接酶．           
（3）基因表達載體的構建包含：目的基因+啟動子+終止子+標記基因．          
（4）將目的基因導入植物細胞常用的方法是農桿菌轉化法，檢則將目的基因導入它的Ti質粒上的T-DNA，使目的基因進入受體細胞C₂，并將其插入到受體細胞C₂中染色體DNA　上，使目的基因的遺傳特性得以穩定維持和表達，形成轉基因萵苣．檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原--抗體雜交．
（5）基因工程的應用除了以上之外還有很多，如用轉基因動物作器官移植的供體，其主要優點是避免免疫排斥反應．
故選答案為：
（1）（用逆轉錄等方法進行）人工合成
（2）限制酶　DNA連接酶
（3）啟動子     標記基因
（4）Ti質粒上的T-DNA　染色體DNA　抗原-抗體雜交
（5）免疫排斥

點評 本題較簡單，考查了基因工程的有關知識，要求學生對基因工程四個步驟中每個步驟中具體細節要進行充分的記憶．同時還要求學生學會讀圖、識圖的能力．