Question

18．請回答下列有關胚胎工程和基因工程等方面的問題：
（1）哺乳動物核移植可以分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植．利用體細胞進行核移植技術的難度明顯高于利用胚胎細胞講行核移植的原因是體細胞分化程度高，不容易恢復全能性．在哺乳動物的核移植實驗中，一般通過_電脈沖（或電刺激）（物理方法）將受體細胞激活，使其進行細胞分裂并發育，當胚胎發育到桑椹胚或囊胚階段時，將胚胎植入同種的、生理狀態相同的另一雌性（代孕）動物體內．為獲得多只與該哺乳動物遺傳物質相同的個體，還可使用胚胎分割技術．
（2）在“試管牛”的培育過程中，要使精子和卵母細胞在體外成功結合，需要對精子進行獲能處理．該處理有培養法和化學誘導法兩種方法．另外，培養的卵母細胞需要發育至MⅡ中期，該時期在顯微鏡下可觀察到次級卵母細胞和第一極體．
（3）在基因工程中若要使獲得的轉基因牛分泌的乳汁中含有人抗凝血酶Ⅲ蛋白，則所構建的基因表達載體必須包括：某種牛乳腺分泌蛋白基因的啟動子、人抗凝血酶Ⅲ蛋白基因（或目的基因）、終止子、標記基因和復制原點等．目前常用的措施是將該基因表達載體導入牛的受精卵（填“受精卵”或“乳腺細胞”）．若要檢測牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用抗原-抗體雜交技術．

Answer 1

分析 1、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、受精前的準備階段
（1）準備階段1-精子獲能．剛剛排出的精子，不能立即與卵子受精，必須在雌性動物生殖道發生相應的生理變化后，才能獲得受精能力．
（2）準備階段2-卵子的準備，動物排出的可能是初級卵母細胞也可能是次級卵母細胞，都要在輸卵管內進一步成熟，達到減數第二次分裂中期時，才具備與精子受精的能力．

解答 解：（1）由于體細胞分化程度高，不容易恢復全能性，因此利用體細胞進行核移植技術的難度明顯高于利用胚胎細胞進行核移植．在哺乳動物的核移植實驗中，一般通過電脈沖（或電刺激）將受體細胞激活，使其進行細胞分裂并發育；當胚胎發育到桑葚胚或囊胚階段時，將胚胎植入另一雌性（代孕）動物體內．為獲得多只與該哺乳動物遺傳物質相同的個體，還可使用胚胎分割技術．
（2）在“試管牛”的培育過程中，要使精子和卵母細胞在體外成功結合，需要對精子進行獲能處理有培養法和化學誘導法兩種方法．另外，培養的卵母細胞需要發育至MⅡ中期，該時期在顯微鏡下可觀察到次級卵母細胞和第一極體．
（3）在基因工程中若要使獲得的轉基因牛分泌的乳汁中含有人抗凝血酶Ⅲ蛋白，則所構建的基因表達載體必須包括：某種牛乳腺分泌蛋白基因及其啟動子、人抗凝血酶Ⅲ蛋白基因（或目的基因）、終止子、標記基因和復制原點等．培育轉基因動物時，常以受精卵為受體細胞，且將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法．若要檢測牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用抗原-抗體雜交技術．
故答案為：
（1）體細胞分化程度高，不容易恢復全能性   電脈沖（或電刺激）  胚胎分割
（2）培養法和化學誘導法   MⅡ中期
（3）人抗凝血酶Ⅲ蛋白基因（或目的基因）   受精卵  抗原-抗體雜交

點評 本題考查基因工程、細胞工程和胚胎工程的相關知識，要求考生識記核移植的具體過程；胚胎移植的基本程序；識記基因工程的具體操作步驟，掌握各步驟中的細節，能結合所學的知識準確答題．