Question

15．Rag₂基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞．科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療．其技術流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的細胞核（結構）．
（2）培養細胞過程中，要置于CO₂培養箱中，CO₂的主要作用是維持培養液的pH．
（3）用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag₂基因片段．為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點．
（4）基因治療是治療遺傳性疾病最有效的手段，該病很難用一般藥物進行治療．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療的過程圖解，其中①表示核移植過程，②表示早期胚胎培養過程，③表示采用基因工程技術將目的基因導入受體細胞．

解答 解：（1）核移植是指將體細胞核移植到去核卵母細胞中，因此①核移植過程中，在核移植前應去除卵母細胞的細胞核．
（2）動物細胞培養時應該置于CO₂培養箱中，CO₂的主要作用是維持培養液的pH．
（3）基因工程中構建基因表達載體時，應用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，若用HindIII和PstI限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag₂基因片段，則為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點．
（4）基因治療是治療遺傳性疾病最有效的手段，該病很難用一般藥物進行治療．
故答案為：
（1）細胞核  
（2）維持培養液的pH  
（3）HindⅢ和PstⅠ
（4）遺傳性疾病

點評 本題結合圖解，綜合考查基因工程、細胞工程和胚胎工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節問題；識記核移植的具體過程；識記體外受精的具體過程及早期胚胎發育的過程，能結合所學的知識準確答題．