Question

17．人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得．流程如圖：
（1）htPA基因與載體用同種限制性核酸內(nèi)切酶（或同種限制酶）切割后，通過DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達載體．檢測目的基因是否已插入受體細胞DNA，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術(shù)．
（2）將重組表達載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是顯微注射法． 
（3）若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA，說明目的基因成功表達．

Answer 1

分析 DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
該基因工程需要對羊的性別進行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進行移植．

解答 解：（1）htPA基因與載體需要用同種限制性核酸內(nèi)切酶（或同種限制酶）切割，形成相同的黏性末端，然后再通過DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達載體．檢測目的基因是否已插入受體細胞DNA，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術(shù)．
（2）將重組表達載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是顯微注射法．
（3）若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達．
故答案為：
（1）同種限制性核酸內(nèi)切酶（或同種限制酶）   DNA分子雜交（或核酸探針）
（2）顯微注射法  
（3）htPA （或人組織纖溶酶原激活物）

點評 本題考查了基因工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生能夠識記基因工程的操作步驟；明確該基因工程中需要選擇母羊進行胚胎移植；識記細胞全能性的概念等．要求考生具有扎實的基礎(chǔ)知識，難度適中，屬于考綱中識記、理解層次的考查．