Question

某研究小組欲將已知抗鹽基因導人原生質體培育抗鹽菊科植物。請回答：

（1）為獲得大量抗鹽基因，可通過 技術進行擴增，也可將其連接到 上，通過大腸桿菌培養擴增。

（2）制備葉片原生質體的酶混合液中，一般含較高濃度的甘露醇，其目的是避免制備的原生質體 。酶混合液需通過 滅菌，才能用于無菌原生質體的制備，整個無菌操作過程需在 中進行。

（3）可通過 方法，直接將抗鹽基因導入原生質體的細胞核。此外，還可用聚乙二醇融合、電擊等方法導入。導入后的原生質體需再生出 ，經持續分裂獲得愈傷組織，進一步分化獲得再生植株并擴大繁殖。

（4）利用帶有標記的抗鹽基因特殊片段與從轉基因植株提取的RNA進行 ，驗證抗鹽基因是否被整合到受體的細胞中并轉錄。通過將擴大繁殖的再生植株轉接到含有 的培養基，根據生長狀況初步篩選出抗鹽植株。

（5）為了獲得大量該轉基因植株，可將帶腋芽的莖段轉入適宜培養基中，獲得大量 ，然后轉入生根培養基中誘導生根，形成再生植株。再生植株需進行 （不定項選擇：

A．無菌處理

B．鍛煉

C．去除根部殘留的培養基

D．逐步提高濕度處理）后才能移種大田。

Answer 1