Question

18．如圖是轉基因抗蟲棉花的培育過程示意圖，請據圖分析回答問題：

注：①HindⅢ，BamHⅠ、SalⅠ為限制酶，識別的序列分別為-A↓AGCTT-、-G↓GATCC-、-G↓TCGAC-．
②影印培養法是一種類似“蓋章”的接種方法．用滅菌的絲絨布制成的“印章”將培養基A上菌落中的細菌接種到培養基B的相同位置上，待培養一段時間后，將兩種培養基的相同位置上的菌落做對比．
（1）在構建重組質粒時，應選用限制酶SalⅠ和HindⅢ對目的基因和質粒進行切割．以保證重組DNA的序列是唯一的．
（2）用影印培養法是為了篩選出導入了目的基因的農桿菌，培養基A和B在成分上的區別是抗生素種類不同，培養基A中是氨芐青霉素，培養基B中是四環素．應選擇菌落4和6中的農桿菌將抗蟲基因導入棉花細胞．將農桿菌接種到培養基A上所使用的方法是稀釋涂布平板法．
（3）愈傷組織形成后一般要將其先轉接到叢芽（填“生根”或“叢芽”）培養基上．
（4）經抗蟲接種實驗從培養出的棉花植株中篩選出抗蟲個體，可利用PCR技術快速獲得大量抗蟲基因，用于擴增的引物應選擇下網中的a和d．

Answer 1

分析 分析題圖：質粒和含抗蟲基因的DNA片段上均有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制性核酸內切酶酶切位點．
在質粒上，這三種限制酶的切割位點都位于抗四環素基因上，用其任何一種酶都會破壞四環素抗性基因；在含抗蟲基因的DNA片段上，BamHⅠ位于目的基因上，用BamHⅠ切割會破壞目的基因．

解答 解：（1）要保證重組DNA的序列是唯一的，且防止自身環化，應選用兩種限制酶分別切割目的基因和質粒，且不能破壞目的基因，故只能選用限制酶SalⅠ和HindⅢ．
（2）導入了重組質粒的農桿菌中有氨芐青霉素抗性無四環素抗性，導人了質粒的農桿菌中既有氨芐青霉素抗性也有四環素抗性，根據這個特點應先將農桿菌涂布在含氨芐青霉素的培養基（A）表面，長出的菌落中農桿菌含重組質粒或質粒，再通過影印培養，將這些菌落中的細菌接種到含四環素培養基（B）的相同位置上，待培養一段時間后，將這兩種培養基的相同位置上菌落做對比，在培養基A上出現、在培養基B上不出現的菌落中農桿菌是導人了重組質粒的．
（3）愈傷組織形成后一般要將其先轉接到叢芽培養基上，因叢芽能進行光合作用且能合成生長素，有利于生根．
（4）DNA復制過程中，子鏈的延伸端為3a'端，因此只能選擇引物對a和d，才能通過PCR技術獲得大量抗蟲基因．
故答案為：
（1）SalⅠ和HindⅢ
（2）抗生素種類不同，培養基A中是氨芐青霉素，培養基B中是四環素   4和6   稀釋涂布平板法
（3）叢芽
（4）a和d

點評 本題以轉基因抗蟲棉花的培育為素材，考查基因工程和植物組織培養的相關知識，意在考查考生的理解能力、識記能力和應用能力．