Question

研究發現僅在大豆葉肉細胞中存在一種多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白（PGP），它能夠特異性地抑制部分致病真菌細胞內的多聚半乳糖醛酸酶的活性，從而減弱病原菌對植株的侵害．研究人員成功地將PGP基因導入小麥體內，以期獲得抗根腐病能力更高的小麥新品種．請分析回答問題：
（1）反轉錄法是基因工程中獲得目的基因的常用方法，本研究中獲取模板RNA的大豆細胞最好取自

 

，在提取RNA過程中要特別注意防止RNA的水解，試提出一種保護措施：

 

．
（2）目的基因的擴增常采用

 

技術，而引物的設計是獲得大量高純度目的基因的關鍵．引物中堿基數量越多，則引物的特異性越

 

．
（3）如圖是本研究使用的質粒載體pAHC25的酶切圖譜．用限制酶SacⅠ和BamHⅠ同時處理pAHC25，結果會產生

 

種不同的片段．在構建含PGP基因的表達載體時，分析質粒酶切圖譜，研究人員選擇了有單一酶切點的限制酶SmaⅠ和SacⅠ作為本研究的工具酶，其優點是

 

（4）研究人員用基因槍法轉化該小麥的幼胚細胞，選擇幼胚細胞的原因是

 

，容易誘導形成植株．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：分析題圖：圖示是質粒載體pAHC25的酶切圖譜，該質粒含有多個酶切位點（有1個限制酶SacⅠ的切割位點、2個限制酶BamHⅠ的切割位點、有1個限制酶SmaⅠ的切割位點、有4個限制酶SalⅠ的切割位點、有2個BglⅡ的切割位點等）；含有2個標記基因（1和2）；含有啟動子．

解答： 解：（1）多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白（PGP）僅存在于大豆葉肉細胞中，因此獲取模板RNA的大豆細胞最好取自大豆葉肉細胞；RNA的水解需要RNA酶起作用，所以能抑制RNA酶活性的方法均可．
（2）擴增目的基因可采用PCR技術；采用PCR技術擴增目的基因時一對引物，引物中堿基數目越多，且特異性越強．
（3）在環狀質粒pAHC25上有1個Sac I酶切位點和2個BamH I酶切位點，所以用這兩種酶同時處理pAHC25，將會使環狀質粒出現3個切口，產生3種不同的片段；因為限制酶Sma I和Sac I都只有單一酶切點，所以對質粒切割后可以保證目的基因插入部位和方向的準確，不會影響基因表達載體的表達．
（4）用基因槍法轉化時，選擇幼胚細胞的原因是幼胚細胞分裂旺盛，全能性高，容易誘導形成植株．
故答案為：
（1）大豆葉肉  在低溫條件下快速提取（或加入適量的RNA酶抑制劑）
（2）PCR   高
（3）3 可以保證目的基因插入部位和方向的準確
（4）分裂旺盛，全能性高

點評：本題結合圖解，考查基因工程的技術及原理、酶的特性及影響因素，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，能根據題中信息“僅在大豆葉肉細胞中存在一種多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白（PGP）”和圖中信息答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．