Question

10．人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可在轉htPA基因母羊的羊乳中獲得，生產流程如圖所示．有關敘述正確的是（　　）

• A． 構建重組表達載體是需要用DNA聚合酶和DNA連接酶
• B． 檢測目的基因是否已轉錄出mRNA，可采用分子雜交技術
• C． 將重組表達載體導入受精卵之前用CaCl ₂ 處理，有利于提高轉化效率
• D． 若在母羊的體細胞中檢測到htPA基因，說明目的基因成功表達

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：A、構建基因表達載體需要限制酶和DNA連接酶，不需要DNA聚合酶，A錯誤；
B、檢測目的基因是否已轉錄出mRNA，可采用分子雜交技術，B正確；
C、將目的導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法，將目的基因導入微生物細胞時需要用CaCl ₂ 處理，C錯誤；
D、若在母羊的體細胞中檢測到htPA基因，說明目的基因成功導入受體細胞，在轉htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達，D錯誤．
故選：B．

點評 本題結合轉htPA基因母羊的培育過程圖，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各步驟中的相關細節，能結合所學的知識準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．