Question

8．某動物能產生的一種有高利用價值的蛋白質，但產量較低．研究人員利用基因工程等技術，將該蛋白質的基因導入某雙子葉植物體內，發現該基因在根部有較高的表達效應．
請回答下列相關問題：
（1）研究人員以動物體內該蛋白質的mRNA為模板，經反轉錄產生的cDNA作為目的基因．在構建基因表達載體時，在目的基因首端一定要有啟動子序列，尾端要有終止子 序列，才能使目的基因正常轉錄．
（2）將目的基因導入該植物細胞，可用農桿菌轉化法，該方法能使Ti質粒上的T-DNA將目的基因插入到植物細胞的染色體上．
（3）若要檢測該目的基因在植物體內的表達最終產物，應該取植物的根部細胞，提取蛋白質，利用抗原-抗體雜交技術進行檢測，如果出現雜交帶，則表明目的基因成功表達．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）目的基因的獲取可通過反轉錄法，即以蛋白質的mRNA為模板，經反轉錄產生的cDNA作為目的基因．基因表達載體的構建是基因工程的核心內容，一個表達載體的組成，除了目的基因外，還有啟動子、終止子和標記基因等，因此在構建基因表達載體時，在目的基因首端一定要有啟動子序列，尾端要有終止子序列，才能使目的基因正常轉錄．
（2）將目的基因導入植物細胞，常用農桿菌轉化法，先要將目的基因插入農桿菌Ti質粒的T-DNA中，然后用該農桿菌感染植物細胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細胞的染色體上．
（3）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質常用抗原-抗體雜交技術．若要檢測該目的基因在植物體內的表達最終產物，應該取植物的根部細胞，提取蛋白質，利用抗原-抗體雜交技術進行檢測，如果出現雜交帶，則表明目的基因成功表達．
故答案為：
（1）cDNA    啟動子    終止子
（2）農桿菌轉化    T-DNA
（3）根部    抗原-抗體雜交    雜交帶

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關細節，能結合所學的知識準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．