Question

9．科學家將人的干擾素基因與質粒重組后，導入牛的受精卵，并成功從牛奶中提取到了干擾素．請根據如下操作流程回答相關問題．（已知酶I的識別序列和切點是-G↓GATCC-，酶II的識別序列和切點是-↓GATC-）．

（1）基因表達載體的組成主要包括啟動子，終止子，標記基因，目的基因．
（2）構建基因表達載體用到的酶是限制性核酸內切酶、DNA連接酶．
（3）據圖分析，在構建重組質粒的過程中，目的基因用酶Ⅱ進行了切割，質粒用酶Ⅰ進行了切割．檢驗重組載體導入能否成功需要利用基因Ⅰ 作為標記基因．
（4）研究人員通常采用技抗原--抗體雜交術檢測牛奶中是否含有干擾素．

Answer 1

分析 分析題圖：①②表示基因表達載體的構建過程，酶I的識別序列和切點是-G↓GATCC-，酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-，可見限制酶Ⅱ也能識別酶I的識別序列并進行切割，①②過程需用限制酶Ⅱ進行切割；③表示將重組質粒導入受體細胞（受精卵）的過程，常采用顯微注射法．

解答 解：
（1）基因表達載體的構建組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因
（2）構建基因表達載體時，用限制酶切割目的基因和運載體，再用DNA連接酶連接形成重組質粒．
（3）在構建基因表達載體時，需用限制酶對目的基因和質粒進行切割以形成相同的黏性末端．質粒如果用限制酶Ⅱ來切割的話，將會在質粒在出現兩個切口且抗生素抗性基因全被破壞，故質粒只能用限制酶Ⅰ切割（破壞四環素抗性而保留氨芐青霉素抗性，即將來形成的重組質粒能在含氨芐青霉素的培養基中生存，而在含四環素的培養基中不能生存）；目的基因兩端都出現黏性末端時才能和質粒發生重組，故目的基因只有用限制酶Ⅱ切割時，才會在兩端都出現黏性末端．構建基因表達載體時，基因I未被破壞，而基因Ⅱ被破壞，所以檢驗重組載體導人是否成功需要利用基因I作為標記基因．
（4）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，采用抗原-抗體雜交技術．
故答案為：
（1）啟動子      終止子       標記基因       目的基因      
（2）限制性核酸內切酶          DNA連接酶    
（3）酶Ⅱ酶Ⅰ基因Ⅰ
（4）抗原--抗體雜交

點評 本題結合流程圖，考查基因工程、蛋白質工程和胚胎工程的相關知識，意在考查考生分析題圖提取有效信息的能力；識記能力和理解所學知識要點，把握知識間內在聯系的能力；能運用所學知識解決生物學問題的能力．