Question

5．下面是探究如何從土壤中分離出自生固氮菌與計數的實驗，完成下列問題：實驗原理：農田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多．將用表層土壤制成的稀泥漿，接種到無氮培養基上進行培養．在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長繁殖．用這種方法，可以將自生固氮菌與其他細菌分離．材料用具：農田的表層土壤、無氮培養基、牛肉膏蛋白胨培養基、盛有9mL無菌水的試管、無菌吸管、無菌涂布器、無菌培養皿、盛有90mL無菌水的錐形瓶、恒溫箱．
（1）方法步驟：
①倒平板：分別將無氮培養基、牛肉膏蛋白胨培養基倒平板，應在酒精燈火焰旁操作．
②制備土壤稀釋液：取土樣10g加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻．用無菌吸管吸取上清液1mL，轉至盛有9mL的無菌水的試管中，依次稀釋到10⁷稀釋度．
③涂布：按照由107～103稀釋度的順序分別吸取0.1mL進行平板涂布，每個稀釋度下，無氮培養基應至少涂布3　個平板，牛肉膏蛋白胨培養基涂布1個．
④培養：放入恒溫箱內，在28℃～30℃下培養3d～4d．
⑤細菌的計數：當菌落數目穩定時，選取菌落數在30～300的平板進行計數．如果測定的平均值為50，則每克樣品中的菌株數是5×10⁷．（稀釋度是10⁵）
（2）預期結果：相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨培養基上的菌落數多于　（選填“多于”或“少于”）無氮培養基上的數目．原因是無氮培養基上只有自生固氮菌能生長繁殖，而牛肉膏蛋白胨培養基上大多數菌類都能生長．
（3）制備牛肉膏蛋白胨培養基的操作過程是：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．

Answer 1

分析 1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養基：
（1）計算：依據是培養基配方的比例．
（2）稱量：牛肉膏比較黏稠，可同稱量紙一塊稱取．牛肉膏和蛋白胨易吸潮，稱取時動作要迅速，稱后及時蓋上瓶蓋．
（3）溶化：牛肉膏和稱量紙+水加熱取出稱量紙→加蛋白胨和氯化鈉→加瓊脂（注意：要不斷用玻璃棒攪拌，防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂）→補加蒸餾水至100mL．
（4）調pH；
（5）滅菌：培養基采用高壓蒸汽滅菌，培養皿采用干熱滅菌．
（6）倒平板．
3、為避免實驗誤差，保證結果準確，一般設置3～5個平板，選擇菌落數在30～300的平板進行計數，并取平均值．

解答 解：（1）①在酒精燈火焰旁倒平板，可以減少雜菌污染．
③為了避免實驗誤差，保證結果準確，一般設置3～5個平板，空白對照組需要牛肉膏蛋白胨培養基涂布1個．
⑤選擇菌落數在30～300的平板進行計數，并取平均值．如果測定的平均值為50，則每克樣品中的菌落數為（50÷0.1）×10⁵=5×10⁷．
（2）肉膏蛋白胨培養基作為對照，以消除無關變量對實驗結果的影響，該培養基適合其他細菌生存，所以，它比無氮培養基上的菌落數目多．
（3）制備牛肉膏蛋白胨固體培養基的步驟是計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．
故答案為：
（1）酒精燈火焰    3   1   30～300   5×10⁷
（2）多于    無氮培養基上只有自生固氮菌能生長繁殖，而牛肉膏蛋白胨培養基上大多數菌類都能生長
（3）計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板

點評 本題考查微生物的分離和培養，要求考生識記制備培養基的一般步驟，掌握微生物計數常用的方法，能結合所學的知識準確答題．